Схемы объемные фигуры из бисера: красивые объемные фигурки из бисера схемы: 24 тис. зображень знайдено в Яндекс.Зображеннях

Схемы животных из бисера: мастер класс для начинающих

Плетение из бисера – трудоемкий, но увлекательный процесс, требующий терпения и усидчивости помощью, с помощью которого можно сделать множество интересных вещей. Начинающим рукодельницам можно порекомендовать изготовить своими руками забавные фигурки животных. Поможет в этом наш подробный мастер класс с пошаговыми описаниями процесса, схемы животных, которых мы сплетем из бисера, прилагаются.

Как научиться плетению по схемам животных из бисера своими руками

Учимся делать плоские фигурки на проволоке

Попробовать свои силы в бисероплетении рекомендуется с создания плоских фигурок в виде забавных мордашек животных.

Необходимые материалы и оборудование:

• округлый бисер или рубка разного цвета;
• тонкая проволока для бисероплетения;
• ножницы;
• дополнительная фурнитура по желанию.

Порядок работы.

Работа выполняется в технике параллельного плетения, схема которого приведена ниже.

Отрезаем кусок проволоки и набираем первый ряд бисера в заданной последовательности по схеме, сдвигая все элементы в центр. Затем следующий ряд плетем параллельно первому, пропуская через бисер левую часть отрезка проволоки в правую сторону, а правую – в левую. Таким способом плетем по рисунку, убавляя и прибавляя бисер в заданных местах. Если фигурка состоит из нескольких частей, они плетутся отдельно, а затем соединяются в общем рисунке. По мере работы можно придавать изделиям определенную форму и оставлять их плоскими.

Ниже приведены схемы для начинающих, позволяющие сплести из небольшого количества бисера миниатюрные мордочки животных.

Полученные плоские фигурки можно использовать для создания брелоков, украшений, подвесок елочных игрушек и т.д. Для этого при плетении последнего ряда пропускаем через проволоку нужную фурнитуру (кольцо для брелока, крепление для украшений) и закрепляем ее несколькими витками лески и узелком.

Учимся мастерить еще и объемные фигурки на леске

Для плетения объемных фигурок из бисера можно использовать не только проволоку, но и леску или специальную упрочненную нить. Поделки на леске получаются более воздушными, рельефными и фактурными. Попробуем сплести небольшого крокодильчика.

Для работы нам потребуется немного зеленого бисера, леска и тонкие длинные иголки для работы с бисером. Можно обойтись без иголок, но в этом случае леску следует обрезать как можно ровнее, чтобы она лучше проходила через бисер. Для оформления глазок, когтей и полосок на спинке можно использовать остатки бисера желтого, черного и других цветов.

Работа также осуществляется параллельным плетением, начиная с пасти крокодила или хвоста. При плетении с хвоста набираем на отрезок лески одну бисерину, а в следующую бисерину пропускаем противоположные концы лески и затягиваем. Каждый раз повторяем ряд дважды, стараясь достаточно туго затягивать леску. В каждой последующей паре рядов при необходимости прибавляем или убавляем одну бисерину. Для того, чтобы сделать крокодильчику лапки, можно набрать по 3 бисеринки в конце ряда и продолжить плетение привычным способом. В нашем случае лапки плетутся отдельно и закрепляются по бокам фигурки в конце работы. Для этого леску необходимо пропустить через соответствующий ряд бисера на теле животного. Чтобы лапки были более устойчивы, можно сплести их с помощью проволоки, а не лески. Плетем фигурку целиком по приведенной ниже схеме, в конце леску завязываем на узел, обрезаем и оплавляем с помощью зажигалки.

По принципу плетения крокодильчика можно сделать ящерку. В этом случае туловище будет равномерным по толщине, то есть в каждом ряду будет использоваться одно и то же количество бисера. В работе очень важно затягивать леску с одинаковым натяжением по всей длине фигурки, чтобы она не деформировалась.

В технике объемного параллельного плетения можно сделать забавные насадки на карандаш в виде фигурок животных, как на фото ниже.

Работа начинается с нижней части изделия, ряды бисера постепенно укорачиваются с образование округлой головы животного. Мордочка оформляется с одной стороны с помощью бисера контрастного цвета. Лапки, ушки и хвостики плетем отдельно. Для плетения зайчика из розового бисера можно воспользоваться следующей схемой.

Каждый ярус плетем двумя одинаковыми рядами, плотно затягивая леску. Для удобства можно нанизывать бисер сразу на форму из карандаша. То есть один ряд бисера будет обхватывать карандаш с одной стороны, а параллельный ему – с противоположной стороны. В конце плетем ушки. Чтобы сделать их более острыми, можно воспользоваться проволокой вместо лески.

Аналогичным образом плетем миниатюрную кошечку. Для этой фигурки можно сделать лапки и хвостик. Чтобы они свисали, сильно затягивать леску не нужно. При желании можно сделать усики из лески или ниток.

В конце закрепляем леску, пропуская ее несколько раз через элементы последнего ряда, завязываем на прочный узелок и оплавляем над пламенем зажигалки. Используя бисер разного цвета и дополняя его различными элементами, можно сплести практически любое животное.

Видео-подборка по теме статьи

Другие модели поделки в виде фигурок животных из бисера вы сможете сделать своими руками, посмотрев приведенные ниже пошаговые видео уроки.

мастер-класс с фото и видео

Каждый когда-нибудь задумывается о том, как, используя что-то маленькое, сделать свой образ уникальным и необычным, добавить уюта интерьеру, порадовать родных и близких или развлечь ребенка в свободный денек. У всех этих, сложных на первый взгляд, вопросов есть весьма простое решение. Оригинальным и хорошим решением могут стать симпатичные зверьки из бисера. В такой работе очень помогут схемы животных из бисера, их и рассмотрим в данной статье.

Варианты применения

У маленьких моделей зверят из бисера существует огромное количество методов применения. Самым распространенным являются брелоки для ключей. Ключи с охранником в виде льва или пса будут смотреться очень необыкновенно и интересно. А фигуры котов и медвежат будут выглядеть очень мило и симпатично.

Сфера использования маленьких фигурок весьма разнообразна. В первую очередь на ум приходят брелоки для ключей. Очень необычно выглядит связка, которую охраняет лев или собака из бисера, не так ли? Да и маленькие аккуратные фигурки котиков и мишек смотрятся на ключах потрясающе.

Еще такие зверята хорошо смотрятся в виде подвесок. Для этой цели лучше создавать объемные изделия, которые будут привлекать взгляды, и создавать настроение.

Животных из бисера можно использовать в виде брошей. Красивые бабочки или стрекозы будут шикарно сочетаться с блузками и придавать изюминку. Их можно использовать как декоративный элемент для украшения основного подарка или деталью интерьера, если сделать их крупнее. При помощи объемной техники можно создать игрушки в зоопарк для детей, а также они смогут создать животных и своими руками, ведь они не сложны в исполнении и для начинающих.

Легкие схемы

Потребуются следующие материалы и инструменты:

1. Бисер подходящих под выбранное животное цветов;
2. Леска, проволока или нить;
3. Игла для бисероплетения;
4. Фурнитура для задумки: крючки, кольца и т. д.

Чаще всего фигуры зверят делают на проволоке, потому что она отлично держит форму, или на леске. Помимо вышеперечисленного еще потребуются схема по созданию выбранного животного. Без схематического изображения новичку будет легко запутаться в работе.

Берем отрезок лески, проволоки или нити размером до метра, в зависимости от выбранной фигуры и размера будущего животного. Складываем отрезок пополам, в центре фиксируем при помощи булавки, также можно использовать крючок для брелока, как показано на фото ниже. Вначале продеваем два конца лески через первые бисеринки. Однако имейте в виду, что для всех зверьков вначале необходимо разное число бисеринок в начальном ряду.

Ниже представлено несколько схематических изображений, по которым получатся плоские зверьки из бисера.

Забавная лягушка:

Грозный львенок:

Устрашающий паучок:

Трудолюбивая пчелка:

Симпатичная черепашка:

Красивая бабочка:

Мудрая Совушка:

Розовый фламинго:

Яркий попугайчик:

Игривый кенгуренок:

Добрый крокодильчик:

Милый котенок:

Божья коровка:

Замечательная овечка:

Необычная ящерка:

Интересный пингвин:

Храбрый щенок:

Объемная техника

Объемные модели зверят из бисера можно применять как игрушки, брелоки, подвески, статуэтки и многое другое. В настоящее время придумано огромное количество схем и форм объемных животных. Давайте подробно разберем, используя мастер-класс, как создать тигренка в данной технике.

Необходимые материалы и инструменты:

1. Бисер коричневого, белого, черного и оранжевого цветов;
2. Бусинки;
3. Иголка для бисероплетения;
4. Проволока.

Такого тигра необходимо создавать, используя мозаичную технику.

Сначала будем плести щеки тигра. Чтобы это сделать, берем проволоку и набираем бисеринку, фиксируем ее продев проволоку сквозь нее еще раз. Для щечек потребуется белый бисер и две черных бисеринки. После создания двух частей щек сшиваем их мозаичным швом.

Берем четырнадцать бисеринок коричневого цвета и делаем нос, используя мозаичное плетение. После чего соединяем его со щечками.

Теперь берем бисер оранжевого цвета, набираем его по кругу с двух сторон от носа. Делаем так четыре ряда чисто из бисера оранжевого цвета, потом добавляем бисер черного цвета, делая глазки тигру. Потом дальше плетем кругами голову зверька, поочередно нанизывая бисер черного и оранжевого цвета, таким образом появляются тигриные полоски.

После этого берем бисер белого и оранжевого цвета и, используя квадратное плетение, делаем уши. Каждое ухо делается из двух частей, белого и оранжевого цвета, после чего их нужно соединить и оплести по кругу оранжевыми бисеринами. Законченные уши прикрепляем к голове тигренка.

Используя бисер белого цвета, создаем нижнюю челюсть, на которой делаем язык из шести бисеринок красного цвета. После чего крепим ее к голове.

Используя оранжевый, белый и черный бисер плетем туловище в полоску для тигра. После семнадцати рядов начинаем уменьшать число бисеринок с боков, а затем и с передней части. Туловище делаем в полоску, а животик белого цвета.

Теперь пора сплести четыре лапки для тигренка. Делаем по шестнадцать рядков и подошву, которую потом соединяем с лапой мозаичным швом. В самом конце делаем хвост. Он выглядит, как квадратный жгут. Остается лишь соединить все сделанные детали между собой, и выйдет милый тигренок.

Видео по теме статьи

Рассмотренные выше схемы и техники далеко не единственные, существует еще огромное множество других, для дальнейшего развития мастерства предлагаем ниже еще несколько видео с уроками по созданию разных зверьков из бисера.

Уроки плетения фигурок из бисера для детей

Содержание

• Организация плетения из бисера для детей
  • Как организовать рабочее место
  • В каком возрасте вы начинаете обучать ребенка ремеслу?
• Кружевное плетение для начинающих
• Бабочка в технике петельного плетения по схеме
• Видео: Мастер-класс бисероплетения стрекозы по схеме

Что способствует развитию интеллекта и эстетического мировоззрения детей? Конечно, народные промыслы. Такая деятельность развивает мелкую моторику и тренирует пальчики, а это сказывается на успеваемости в школе, дети становятся внимательнее, усидчивее. Бисероплетение для детей – один из интересных народных промыслов, который позволяет не только занять ребенка, но и дает неограниченный простор для творческой деятельности.
Крафт недоступен для дошкольников, а потому понравится школьникам. Особенно девочки любят мастерить различные украшения, но и мальчики от них не отстают. Плетение из бисера для детей – это возможность сделать своими руками интересные украшения, поделки, сувениры, которые можно обменять или подарить друзьям. И если в начале обучения дети пользуются схемами, то через некоторое время уже придумывают схемы собственного стиля.

Организация плетения из бисера для детей

Бисероплетение для детей организовать несложно, оно не требует серьезных затрат. Все, что вам нужно купить, это некоторые инструменты и прочее. Все предметы для занятий легко помещаются в школьную сумку. Необходимо, чтобы были следующие материалы:

• Три иглы для бисера. Спицы 12 размера. Этот номер имеет одинаковую толщину по всей длине иглы, что очень удобно для работы с бисером;
• Разноцветные бусины. Должна быть свободно надета на иглу;
• Капроновая нить (монофила, лавсан, леска). Пригодится для вышивки и плетения украшений: браслетов, цепочек;

провод

• . На нем плетут плоские и объемные сувениры. Легко плетется, поэтому с ним удобно работать, придавая изделию нужную форму;
• Леска. Используется для брелоков большого объема, так как провод мнется и изделие выглядит мятым. А вот плоские брелки плетут из проволоки, так как изделия из лески будут похожи на гармошку;
• Различные препараты для украшения;
• Небольшие ножницы для обрезки ниток, проволоки;

клей

• .

Чешский бисер ТМ «Preciosa» Все это продается в Магазинах для рукоделия. В продаже есть проволока разного цвета, длины и толщины. Толщину проволоки следует подбирать с учетом размера бисера, тонкая прогнется под тяжестью крупной бусины.
Чтобы у ребенка не пропало желание заниматься бисероплетением, нужно выбрать качественную бусину. Ведь изделие, на которое было потрачено столько труда, не должно терять цвет и выглядеть перекошенным. Поэтому лучшие бусины калибруются. Это тот, в котором каждая бусина не отличается от другой по форме. Поэтому, выбирая бусы, внимательно изучайте каждый пакетик. Цвет должен быть стабильным. Проверить это можно так: смочите бусины моющим средством, разложите на белой ткани для просушки и проверьте, нет ли пятен. При обнаружении пятен покупать такие бусы не следует. Японские и чешские производители бисера лучшие, поэтому стоит брать их бисер.
Как организовать рабочее место

С какого возраста начинать обучать ребенка ремеслу? Обучать бисероплетению детей можно с семи лет, когда ребенок уже ходит в школу и привык подолгу сидеть за столом. Чтобы заинтересовать детей этим умением, учителю необходимо начать со вступительной речи. Она может включать в себя историю происхождения бисероплетения, где оно возникло, какие черты преобладают у разных народов, рассказать о различных техниках плетения. На вводном занятии необходимо представить детям готовую работу по бисероплетению. Вводные слова и показы работ способны уловить творчество и определить цель труда.

Для начинающих занятие следует строить из основных понятий:

• Когда за основу необходимо брать проволоку, а не нить;
• Какие особенности при плетении проявляются у капроновой нити;
• Чем отличаются иглы для бисера от обычной иглы.

На первых занятиях бусы для детей будут заменены на бусины, которые удобно держать в руках и соединять между собой. Как только они постепенно освоят технику, можно переходить к бисероплетению. Первое упражнение – нанизать на нитку разноцветные бусины. Можно использовать один тон, но задание будет интересным и дети быстро освоят азы плетения, если нить превратить в полосатую гусеницу или радугу.
На втором уроке уже можно брать проволоку и делать на ней конструкции. Вы можете приобрести наборы для творчества со схемами или составить схемы самостоятельно. Бисероплетение для детей младшего возраста должно основываться на простых схемах, так как младшие школьники быстро устают, у них наблюдается рассеянность внимания и неусидчивость. При сложной задаче у них может пропасть интерес, поэтому следует выбирать товары с возрастными возможностями. С детьми семи лет можно сделать цветок, сердце, колечко, бабочку.

Ажурное плетение для начинающих

Схемы бисероплетения для начинающих и детей нужно составить подробно, чтобы их можно было прочитать без особого труда. Глядя на схемы, дети видят будущее изделие целиком в цвете и форме. В начале обучения без схем обойтись невозможно, так как невозможно понять принцип плетения изделий из бисера.
Начинайте работать по нужной вам схеме с плетения петель. Это самая простая техника, для нее понадобятся только бусины и проволока.
Петельки можно сделать несколькими способами:

• Берется проволока и на нее нанизываются бусины (На начальном этапе обучения бисероплетению используем бисер, затем переходим к бисероплетению), загибаем ее в петельку. Концы проволоки, чтобы не рассыпать бисер, завить (рисунок а).
• Соединив кончики проволоки с бусинками, пропустив их через бусину (рис. б), или не скручивая концы, а пропустив их с двух сторон бусинки навстречу друг другу (рис.

Чтобы сделать две петли на одной проволоке, надо взять проволоку длиннее. На нем можно сделать большее количество петель. В этой технике делаются листья и лепестки.

В этой технике выполняются разные деревья. Хотя техника несложная и справится даже новичок, но нужно запастись терпением, так как придется сделать довольно большое количество петель.

Бабочка в технике петельного плетения по схеме

Материалы для бабочки:

• Длинный провод около 30 сантиметров;
• Две бусины для глаз темного цвета;
• Для разноцветных
  разных цветов.

Начинаем плести бабочку по схеме:

Вот несколько простых схем, которые помогут новичкам сделать красивых бабочек и мотыльков своими руками:

В начале обучения бисероплетению используются схемы, дающие представление о том, как из кучки бисера появляется целое произведение искусства! Эта трансформация всегда очаровывает новичков. Со временем это занимательное времяпрепровождение у некоторых детей может перерасти в настоящее хобби или превратиться в профессию.
Для начинающих и детей есть множество пособий и публикаций, которые помогут им справиться с основами бисероплетения.

Видео: Мастер-класс бисероплетения стрекозы по схеме

Комментарии

комментарии

Количественные измерения проточной цитометрии | NIST

Проточная цитометрия является важным инструментом для фундаментальных иммунологических исследований, клинического открытия потенциальных терапевтических средств, разработки и утверждения лекарств и устройств, диагностики заболеваний, терапевтического лечения и мониторинга. Например, проточная цитометрия обычно используется в доклинических и клинических испытаниях для оценки безопасности/эффективности лекарств, в том числе сконструированных Т-клеток. При мониторинге ВИЧ/СПИДа точное измерение количества клеток CD4+ с помощью проточной цитометрии является ключом к обеспечению того, чтобы пациенты получали надлежащее антиретровирусное лечение (АРТ). Однако измерения, сделанные на разных платформах приборов в разное время и в разных местах, зачастую невозможно сравнивать. Расхождения между измерениями вносят неопределенность в диагностические и терапевтические решения и препятствуют развитию фундаментальной науки. Мы сотрудничаем с другими государственными учреждениями, промышленностью, академическими кругами, профессиональными обществами, организациями по стандартизации и полевыми экспертами, чтобы ускорить стандартизацию измерений проточной цитометрии с использованием эталонных контролей, стандартов и процедур измерения.

1. Консорциум стандартов проточной цитометрии –  Целью консорциума является совместная разработка эталонных стандартов, включая биологические эталонные материалы, эталонные данные, эталонные методы и услуги для присвоения эквивалентного количества эталонных флуорофоров (ERF) калибровочным микросферам и оценка связанных с этим неопределенностей и полезности. Это первый шаг к надежным количественным измерениям в проточной цитометрии. Служба назначения ERF в рамках консорциума недавно была расширена до внеклеточных везикул (EV) и частиц размером с вирус.

Схема присвоения значения ERF коммерческим калибровочным микросферам на основе опубликованной стандартной рабочей процедуры NIST с использованием NIST SRM 1934 и исследовательских эталонных материалов NIST и откалиброванного лазерного флуоресцентного спектрометра. Микросферы с заданными значениями ERF позволяют количественно стандартизировать шкалу интенсивности флуоресценции и характеризовать рабочие характеристики проточных цитометров. Значения ERF для определенного канала флуоресценции при заданном наборе условий прибора сопоставимы между приборами и во времени, даже если используются калибровочные шарики разных производителей.

Два межлабораторных исследования были запланированы в рамках консорциума [Рабочая группа (РГ) 1 и 2]. Исследование WG1 направлено на измерение нескольких разных наборов калибровочных шариков ERF и неизвестного биологического образца для сравнения результатов калибровки для разных наборов шариков ERF, инструментов и лабораторий. Результаты этого исследования позволят установить, насколько эффективны калибровочные шарики ERF для получения независимых от инструментов результатов с использованием количественной проточной цитометрии. Целью исследования WG2 является стандартизация анализа количества клеток и здоровья, которые важны для производства генной и клеточной терапии. Исследование направлено на оценку различных контрольных материалов для анализа и инструментов, а также реагентов для анализа и установление стандартной операционной процедуры анализа, обеспечивающей сопоставимость результатов на разных инструментах.

Чтобы узнать больше о Консорциуме стандартов проточной цитометрии, нажмите здесь.

2. Количественное определение клеток с определенными фенотипическими характеристиками – широкие международные совместные усилия по разработке эталонных материалов и контролей на основе клеток крови человека

(I) Точный подсчет клеток с определенными фенотипическими характеристиками имеет решающее значение значение в стационарном лечении. Существует острая потребность в клеточных эталонных материалах для внешней оценки качества измерений в таких областях, как мониторинг ВИЧ/СПИДа (количество клеток CD4+) и переливание крови (количество стволовых клеток CD45+CD34+) в клиниках. Наши ученые разработали и оценили первый международный эталонный стандарт для подсчета клеток CD4+ для мониторинга ВИЧ/СПИДа (WHO BS/10.2153). Точное измерение числа клеток CD4+ является ключом к обеспечению того, чтобы пациенты получали надлежащее антиретровирусное лечение (АРТ) после того, как количество их клеток CD4+ падает ниже 350 клеток на микролитр.

(II) В связи с огромным потенциалом и недавним успехом иммунотерапии в клиниках существует острая потребность в эталонных материалах для клеток и стандартизированных протоколах для оценки функциональных возможностей Т-клеток. Внутриклеточные цитокины являются важными индикаторами иммунной функции и компетентности. Наши ученые создали и оценили эталонный клеточный материал с использованием лиофилизированного препарата нестимулированных (код NIBSC: SS570) мононуклеарных клеток периферической крови (PBMC) и стимулированных форболом 12-миристат-13-ацетатом (PMA)/иономицином PBMC (код NIBSC: 15/272), полученной от здоровых доноров крови. Быстрый одноэтапный метод на основе проточной цитометрии был разработан и проверен на разных инструментальных платформах в трех разных лабораториях для подсчета цитокин-позитивных Т-лимфоцитов.

3. Количественные измерения иммуноонкологических маркеров и биомаркеров заболеваний – (I)   Экспрессия PD-L1 (лиганд 1 запрограммированной клеточной смерти 1) была определена в качестве прогностического диагностического маркера для выбора пациентов, которые могут эффективны при терапии против PD-1 (запрограммированная гибель клеток 1), такой как ниволумаб, пембролизумаб, атезолизумаб и дурвалумаб. В настоящее время на рынке существует несколько качественных анализов PD-L1, либо одобренных FDA, либо разработанных в лаборатории тестов с использованием различных антител для оценки экспрессии PD-L1 с помощью иммуногистохимии (IHC) с использованием хромогенных методов. Из-за отсутствия прослеживаемости и сопоставимости результатов с использованием этих клинических ИГХ PD-L1 мы работаем с сообществом ИГХ, чтобы использовать схему количественного определения, установленную в проточной цитометрии и масс-спектрометрии, для решения проблемы прослеживаемости и сопоставимости в ИГХ. Система калибратора состоит из набора стеклянных микрошариков размером с клетку, ковалентно связанных с рекомбинантным белком PD-L1, конъюгированным с флуоресцеином, и немеченым пептидом. Каждая популяция стеклянных микрошариков определяется определенным соотношением меченного флуоресцеином рекомбинантного белка PD-L1 и немеченого пептида. Интенсивность флуоресценции в единицах ERF каждой популяции микробусин измеряется на основе NIST SRM 19.34 в рамках Консорциума по количественному анализу проточной цитометрии. Культивируемые клетки эпидермального рецептора белка-2 человека ( HER2 ) линии клеток рака молочной железы, например MDA-MB-361, MDA-MB-453 и SK-BR-3 с разными уровнями экспрессии PD-L1, которые количественно определены с помощью количественной масс-спектрометрии, позволят преобразовать количество копий PD-L1 в калибровку, установленную микрогранулами. калибраторы с использованием проточной цитометрии. Эти калибраторы шариков служат системой калибровки как для проточной цитометрии, так и для ИГХ. Перевод количества копий PD-L1 на клетку в калибровку стеклянными шариками позволяет количественно и сопоставимо измерить аналит PD-L1 в IHC.

Схема количественного определения PD-L1 в IHC (правое изображение), которая в конечном итоге прослеживается до эталонных клеток рака молочной железы HER2+PD-L1+ с известным числом копий PD-L1 на клетку (левое изображение). Калибраторы со стеклянными шариками, покрытые меченым флуоресцеином рекомбинантным PD-L1, с которым связаны антитела против PD-L1, служат важным связующим звеном для прослеживаемости измерений, установленной с помощью проточной цитометрии (левое изображение) до ИГХ (среднее и правое изображения).

(II) Проточная цитометрия имеет решающее значение для установления идентичности, чистоты и эффективности производства продуктов клеточной терапии и связанных данных для поддержки утверждения заявок на получение биологической лицензии FDA США и одобрения EMA. Крайне важно установить эталонные контрольные материалы В-клеток для сопоставимого и количественного цитометрического анализа экспрессии, чтобы помочь в производстве клеточной терапии и мониторинге иммунотерапии. Наши ученые определяют уровни экспрессии CD19.на В-клетках в независимой от прибора единице антител, связанных на клетку (АВС), а также соответствующих связанных с ними неопределенностях для трех коммерческих лиофилизированных или высушенных препаратов РВМС. Работа вдохновлена ​​​​согласованным результатом семинаров по проточной цитометрии, которые призывают к эталонным стандартам клеток с хорошо охарактеризованной экспрессией антигена и профилями иммунофенотипирования для передового производства клеток и клеточной терапии. Мы предполагаем, что материалы на основе РВМС в этом исследовании будут полезны в качестве эталонных маркеров для анализа экспрессии для количественной оценки маркеров В-клеток, имеющих отношение к иммунотерапии и иммунотерапии, например. CD19, CD20 и CD22. Количественное измерение этих биомаркеров В-клеточных злокачественных новообразований с высокой достоверностью имеет решающее значение для определения надлежащих вариантов и схем лечения, например. смена препаратов и применение второй дозы того же препарата, что улучшает качество жизни пациента.

4. Разработка материалов для контроля процесса и протоколов для надежных измерений внеклеточных везикул и лентивирусов с использованием проточной цитометрии — Внеклеточные везикулы (ВВ), которые представляют собой биологически активные липидные двухслойные мембраны, находятся в авангарде исследований в области наук о жизни из-за их значительную роль как в физиологических, так и в патологических процессах. Исследования роли EV в этих процессах были в основном сосредоточены на экзосомах (30–150 нм) или микровезикулах (200–1000 нм). Чтобы быстро анализировать эти материалы, проточная цитометрия стала одним из важнейших инструментов характеристики благодаря своим возможностям высокопроизводительного и многопараметрического анализа. Однако анализ ЭВ с помощью проточной цитометрии был ограничен не только из-за их небольшого размера и слабого сигнала от флуоресцентных меток, но и из-за ограниченного уровня опыта многих пользователей инструментов. Таким образом, подробные процедуры тонкой настройки проточного цитометра посредством тщательной калибровки и настройки параметров APD (или PMT) с использованием известных контрольных материалов стали ключевыми для получения надежных и значимых данных. Мы представляем пример метода проточной цитометрии с использованием проточного цитометра CytoFlex. Фенотип EV был охарактеризован путем сравнения общего окрашивания липидной мембраны (PC5.5) с окрашиванием антителами (Y585-PE) нескольких специфических для EV мембранных белков, называемых тетраспанинами (CD9, CD63 и CD81). Как и ожидалось, EV, полученные из A549, являются положительными как для окрашивания тетраспанином, так и для окрашивания липидной мембраны. Кроме того, независимая от данных масс-спектрометрия (DIA-MS) подтвердила, что эти EV, полученные из A549, содержат 132 из известных 138 EV-специфических белков, включая тетраспанины.

Рисунок слева: Точечный график зависимости PC5.5 от Y585-PE, показывающий фоновый контроль солевого буфера с минимальным сигналом в правом верхнем квадранте; Средний рисунок: Точечный график зависимости PC5.5 от Y585-PE с изображением A549-производные EV, окрашенные как липидной мембраной (PC5.5), так и тетраспанином (Y585-PE) в области ворот; Правый рисунок: анализ данных DIA-MS обнаружил 2392 общих белка/образца EV для EV, полученных из A549, из которых 132 белка соответствуют белкам, специфичным для EV.

5. Протеомный и геномный анализ клеток, сконструированных с помощью CRISPR/Cas9, и стабильность клеток –  Наиболее часто используемая система редактирования генома, применяемая для улучшения белковой, клеточной и генной терапии, – это CRISPR/Cas9.. Хотя этот инструмент обладает большим потенциалом, долгосрочные данные о его геномной и фенотипической стабильности и нецелевых эффектах, которые могут возникнуть в процессе редактирования, немногочисленны. Поскольку у пациента с клеточной и генной терапией можно использовать целую клетку, характеристика клеток имеет важное значение для безопасности. В поддержку производства безопасных и эффективных сконструированных CRISPR/Cas9 белковых, клеточных и генных терапий целью этой работы является изучение как целевых, так и нецелевых эффектов CRISPR/Cas9 с использованием проточной цитометрии на В-лимфобластных клетках. линия GM24385, последовательность генома которой хорошо охарактеризована. Важно отметить, что этот проект позволяет нам расширить наши возможности проточной цитометрии для одновременного измерения интересующих транскриптомов и протеомов на уровне одной клетки.

Два графика слева: живые лимфоциты культивируемых клеток GM24385 помещены в точечный график FSC против SSC; Клетки CD19+ под живыми лимфоцитами показаны исключительно на гистограмме CD19 PE. Два правых графика: после редактирования CRISPR/Cas9 генома CD19 для блокировки экспрессии CD19 клетки CD19- становятся доминирующими на гистограмме под воротами живых лимфоцитов.

6. Количественный анализ редких явлений с использованием квантового цитометра –  Гетерогенность раковых клеток и сконструированных терапевтических клеток, давно признанная важной клинической детерминантой результатов лечения пациентов, плохо изучена на молекулярном уровне, в основном из-за текущего ограничения редких событий. количественное определение на уровне одной клетки. Подходы, основанные на ПЦР, требуют извлечения ДНК из образцов пациентов, что приводит к получению средних значений и потере информации о клеточной и популяционной гетерогенности. Другие методы, такие как IHC и флуоресцентная гибридизация in situ (FISH), в лучшем случае дают качественные или субколичественные результаты. Квантовый цитометр может обнаруживать редкие события в одной клетке с высокой пропускной способностью и количественным образом. Мы сотрудничаем с доктором Сергеем Поляковым из Лаборатории физических измерений NIST для подсчета количества копий генов в отдельных клетках. NIST обладает 5 клеточными линиями Jurkat с различным числом копий вируса (VCN) с 0–4 копиями репортера зеленого флуоресцентного белка (GFP), интегрированного в различные геномные локусы. Например, VCN4 означает 4 копии уникальной последовательности, интегрированной в 4 известных эктопических участках генома с репортером GFP клетки Jurkat, VCN0 означает 0 копий (фоновые клетки) и так далее. Используя уникальную информацию о последовательности VCN, мы разрабатываем зонды FISH для различения интенсивности сигналов от различных клеточных линий VCN с различным числом копий. В традиционном анализе FISH используется микроскопия, которая сильно ограничивает количество анализируемых образцов и отнимает много времени. Мы намерены использовать Flow-FISH для анализа образцов с высокой пропускной способностью, сочетая мощность проточного цитометра с анализом FISH. Также разрабатываются ортогональные исследования для подсчета количества копий путем объединения основанного на CRISPR нацеливания на направляющие РНК (гРНК), меченные квантовыми точками (QD), для оценки интегрированной последовательности в сотрудничестве с группой Сергея. Ожидается, что результат этих экспериментов будет достигнут за счет использования проточной цитометрии на основе квантовых точек. Этот метод будет обеспечивать абсолютную количественную оценку путем прямого подсчета количества квантовых точек на ячейку. Этот проточный цитометрический анализ FISH может быть расширен в будущем для одновременного обнаружения редких мутаций генов и белковых биомаркеров на уровне одной клетки для молекулярной и обычной патологии.