Машина из бисера объемная схема: Машинка из бисера. Схема — Подружки

фото идей, видео по исполнению

Изготовление поделок приносит большое удовольствие детям. Сделать можно что угодно, например объемную машину из бумаги. Большим плюсом работы с этим материалом является его безопасность. Именно поэтому знакомство детей с творчеством начинается, как правило, с бумаги.

Бумажные работы могут быть очень интересными и разнообразными. Можно сделать красивые машинки, которые обязательно понравятся маленьким гонщикам. При этом вариантов изготовления такой поделки может быть очень много.

Одно из самых востребованных направлений – оригами. Эта техника подходит для изготовления любых изделий, при этом вовсе не обязательно сразу браться за сложные модели. Машинку из бумаги можно изготовить и многими другими способами.

Важно! Главное, что должны учесть родители, это возраст и способности ребенка.

Не стоит сразу предлагать варианты со множеством деталей и требовать от малыша идеального выполнения работы.

Начинать всегда нужно с малого. Так постепенно ребенок научится обращаться с бумагой, клеем и другими канцтоварами. Изготовление бумажных поделок развивает у малыша творческие навыки, ребенок становится более самостоятельным и инициативным.

Развернутая схема джипа из бумаги

Занятия рукоделием для мальчиков достаточно сложное занятие, так как родителям приходится долго выбирать подходящую тему. Если девочки могут с удовольствием делать цветочки, животных, кукол и т.д., то мальчики от такой работы быстро заскучают.

Но, если предложить малышу сделать своими руками красивую машину, а может быть, и целый автопарк, он обязательно согласится.

Гоночная машинка из туалетной бумаги

Для изготовления понадобится не сама бумага, а только втулка от нее.

Такие картонные цилиндры мастера рукоделия не рекомендуют выкидывать, так как они пригодятся для работы над различными изделиями, в том числе и для красивейшего декора стен дома.

Автомобиль из туалетной бумаги

Помимо этого, необходимо запастись картоном белого и черного цвета, цветной бумагой, фломастерами, клеем и канцелярскими кнопками. Также можно использовать краски.

Схема модели машины из бумаги

Цилиндр будет основой машинки. Для этого его нужно подготовить. Если втулка в хорошем состоянии, ее можно просто раскрасить краской. Цилиндр может быть изготовлен и своими руками из картона, в этом случае придется дополнительно оклеить его цветной бумагой.

Далее нужно сделать колеса из черного и белого картона. Кружочки должны быть одинаковыми по размеру. Белые, выполняющие роль дисков, должны быть меньше черных. Подготовив 4 колеса, необходимо аккуратно приклеить их на цилиндр из картона.

Развернутая схема Toyota из бумаги

После этого можно заняться передней частью машины. Для этого следует вырезать треугольник, который клеится на торец втулки.

Сюда можно приклеить 2 кружочка из желтой бумаги: так у машины появятся фары. Фломастером следует нарисовать решетку радиатора. В задней части приклеить 2 красных кружочка, которые будут стоп-сигналами.

Гоночные машины из бумаги изготовленные своими руками

На этом этапе машинку можно считать готовой. Но можно добавить еще и водителя.

Для этого необходимо вырезать полукруг, который станет ветровым стеклом, а по центру втулки сделать отверстие, где будет сидеть водитель. В машину можно посадить маленького игрушечного человечка либо фигурку из Лего.

Пошаговый пример создания машины из бумаги

На заметку! Такие машинки готовятся очень просто, а получаются интересными и яркими.

При желании можно изготовить вместе с малышом несколько таких машин, а после устраивать гонки.

Ка сделать болиды из бумаги читайте подробнее в статье: Оригинальные поделки для мальчиков из бумаги и картона, конфет, пластилина и памперсов.

Машина с прицепом из картона

Этот вариант поделки тоже считается очень простым. Тут нужны только самые доступные материалы и немного времени.

В итоге получится интересная поделка, с которой малышу будет интересно играть. Стоит заметить, что по такой схеме можно сделать не только машинку, но и поезд.

Для работы понадобится цветная бумага, гофрированный картон, который можно взять из любой коробки, ножницы, клей, болтик с гайками и веревку с шилом. По этому набору родителю должно быть понятно, что самостоятельно ребенок не может работать над этой поделкой и понадобится присмотр со стороны взрослых.

Для работы понадобится цветная бумага, гофрированный картон

Что касается того, как сделать из бумаги машину, то для начала понадобится картон. На нем следует нарисовать корпус автомобиля и прицепа. 6 одинаковых колес также вырезаются из гофрированного картона.

При этом ребенку, скорее всего, не обойтись без помощи взрослых, так как плотный картон тяжело разрезать.

Схема машины в развернутом виде из бумаги

После того как заготовки будут выполнены, можно оклеить их цветной бумагой либо раскрасить красками. Из цветной бумаги вырезаются окна автомобиля, делаются фары и стоп-сигналы. Не стоит забывать о прицепе: на нем будет 2 колеса, а учитывая, что поделка будет двухсторонней, следует тщательно обрабатывать обе стороны картона. Более того, нужно проследить за тем, чтобы все было одинаковым с каждой стороны.

Далее начинается сложная работа по сборке деталей. Тут без помощи взрослых ребенку не обойтись. Для начала нужно проделать шилом 2 отверстия в нижней части машины и 1 в прицепе. В центре каждого колеса тоже нужно сделать по отверстию.

Теперь все колесики крепятся к кузову и прицепу при помощи болтов с гайками. Тут можно дать ребенку самостоятельно потрудиться и даже предоставить для этого соответствующие инструменты. Малышу будет это не только интересно, но и полезно.

Развернутая схема УАЗа из бумаги

В последнюю очередь автомобиль соединяется с прицепом. Для этого нужно проделать 2 отверстия шилом, а после связать элементы ниткой.

Трехмерная машина по схеме

Такие варианты поделок относятся к более сложным. С работой справится ребенок, который умеет управляться с ножницами и клеем.

В целом весь процесс заключается в том, чтобы найти машину из бумаги, то есть шаблоны для распечатки, вырезать их и аккуратно склеить. Но результат окажется очень интересным. Такие машинки смогут занять малыша на долгое время.

Развернутая схема машины из бумаги

Проще всего для изготовления трехмерного автомобиля использовать уже готовые чертежи. Это оптимальные модели, где все параметры проверены, а малышу остается только вырезать и склеить трехмерную машину.

Если художественного мастерства у родителей достаточно, плюс к этому имеются навыки в черчении, можно создать и собственную модель. Это будет уникальный автомобиль, но принцип его изготовления останется тем же.

Развернутая схема фиата из бумаги

Для создания трехмерной машинки готовые шаблоны машин для вырезания из бумаги распечатывают, затем наклеивают на тонкий картон и вырезают. По возможности можно сразу распечатывать заготовку на плотной бумаге или ватмане.

Развернутая схема delorean из бумаги

На заметку! В таких моделях обязательно должны присутствовать белые уголки.

Это клапаны для склеивания деталей. После того как основа будет согнута по линиям, указанным на схеме, следует нанести клей на белые участки. Затем все тщательно склеивается. Придётся потратить некоторое время, зато результатом будет красивая объемная модель.

Машина из бумаги в технике оригами

Этот вариант считается самым сложным. Оригами – это целое искусство, которому многие посвящают много времени, чтобы оттачивать свое мастерство. Чтобы стать мастером в этом деле, необходимо запастись терпением и несколькими листами бумаги. Не стоит переживать, если с первого раза не получится.

Важно! Специалисты в области искусства оригами рекомендуют для начала научиться ровно складывать лист бумаги.

После того как руки приобретут хоть небольшой опыт, можно переходить к выполнению изделий. При этом стоит заметить, что машинка в технике оригами считается достаточно сложной поделкой. Поэтому для начала можно вместе с ребенком выполнить элементы попроще.

К примеру, всем известный самолетик станет прекрасной тренировкой для детских пальцев. Это даст хороший старт и приучит ребенка правильно сгибать и разгибать детали. Специалисты уверяют, что от того, насколько ровным будет сгиб, зависит конечный результат. Если ошибиться в одном месте, то все изделие выйдет кривым.

Техника оригами считается достаточно сложной, поэтому родители не должны оставлять ребенка наедине с этой работой. Хотя здесь не пригодятся ножницы и даже клей, помощь взрослых малышу обязательно понадобится. К примеру, ему нужно будет объяснить последовательность схемы. После того как ребенок сделает машинку один раз со взрослыми, он сможет повторить это самостоятельно.

Для изготовления автомобиля в технике оригами необходим только один лист бумаги. Если это формат А4, нужно взять ножницы, чтобы превратить лист в квадрат.

Гоночный болид из бумаги

Первым шагом будет сгибание листа пополам, а после еще раз пополам. Далее следует раскрыть бумагу. По сгибам будет видно, что тут отмечена середина и каждая сторона поделена на 2 равные части.

Теперь нужно взять нижний край и сложить его пополам, то есть подвести к центру листа. Уголки от центральной точки отгибаются вниз. Они в будущем станут колесами транспортного средства.

Вариант оригами из денежных купюр

Верхняя часть листа загибается вперед до середины. После этого от нее отгибается более половины в обратную сторону. Продолжая работу с этой же частью, отгибают по диагонали от центра часть листа. Теперь заготовку можно перевернуть. Она уже будет похожа на машинку. Здесь видны колеса и есть кузов, который получился в варианте хэтчбек. На этом этапе можно раскрасить автомобиль, нарисовать окна, фары и т.д.

В технике оригами можно выполнить и более сложные изделия. Но для начинающих мастеров, а особенно в детском возрасте, такой автомобиль будет наиболее подходящим вариантом попробовать свои силы. Натренировав руку, можно переходить и к более трудоемким в исполнении поделкам, в том числе и грузовым машинам.

18 идей ► жук, муха, шмель и кузнечик ◀

Home » Животные и насекомые » Популярные насекомые из бисера — понятные схемы плетения

Содержание:

• 1 Актуальность поделок из бисера
• 2 Организация рабочего места
• 3 Инструменты и материалы
  • 3.1 Круглый бисер
  • 3. 2 Стеклярус
  • 3.3 Бусины
• 4 Популярные схемы и техники
  • 4.1 Объемное
  • 4.2 Параллельное
  • 4.3 Мозаичное
• 5 Схема плетения жука
• 6 Как сплести муху
• 7 Шмель из бисера
• 8 Объемный кузнечик
• 9 Советы по выполнению

Лучше всего начинать знакомится с миром бисероплетения с маленьких поделок. Для этой цели отлично подойдут насекомые из бисера. Их разнообразие поможет пофантазировать с цветом и фактурой. Можно создавать как плоские, так и объемные фигурки. В дальнейшем используйте насекомых для брелков, брошек и заколок.

Актуальность поделок из бисера

Бисер – полезный материал, особенно для детей. Вот несколько причин чтобы отдать ребенка на занятия бисероплетением:

• развивают мелкую моторику;
• учат усидчивости;
• помогают ценить труд;
• развивают творческое мышление;
• ребенок может проектировать изделия;
• можно экспериментировать с цветами и фактурой;
• укрепляют мышцы пальчиков;
• развивают координацию движения;
• помогают доводить начатое до конца;
• развивают хороший вкус;
• сплачивают и укрепляют семью во время творчества.

Но бисер стал не только детским развлечением, это творчество уже давно превратилось в способ заработка. Многие дизайнеры используют блестящие стекляшки для украшения своих моделей. Ни одна модница не обходится без сумочки или футболки, расшитой бисером.

В Индии активно процветают украшения и бытовые предметы из этого материала. Был случай, когда целиком облагородили машину бисером.

Вы можете воплотить все свои задумки и украсить такие предмет, как:

• одежду;
• обувь;
• предметы интерьера;
• стены;
• бижутерию;
• технику.

Организация рабочего места

Продуктивность зависит от правильно организованного рабочего места.

Чтобы вас ничего не отвлекало и было максимально комфортно, соблюдайте несколько правил:

• работайте в дневное время, если это невозможно, хорошо освещайте рабочий уголок;
• поверхность должна быть ровной;
• на стол постелите белую скатерть и загните углы. Так бисер будет хорошо видно, и он не сможет упасть;
• используйте удобные емкости для бисера;
• не смешивайте похожие оттенки;
• во время работы нужный бисер пересыпьте в емкости с низкими краями или насыпьте на стол приблизительное количество;
• на столе или рядом должна стоять корзина для мусора;
• положите весь материал и инструменты в большую коробку, так вы всегда быстро будете находить необходимые вещи;
• не убирайте коробку далеко, чтобы во время творческого порыва вам не пришлось долго готовить рабочее место;
• все коробочки должны быть ярких цветов. Пусть творчество ассоциируется с приятными эмоциями, чтобы им хотелось заниматься чаще;
• разложите с правой стороны схемы и эскизы;
• не храните на рабочей поверхности ненужные вещи;
• делайте перерывы между занятиями, особенно с детьми.

Рабочий уголок – важное место для мастерицы. Он должен быть уютным и комфортным. Создайте для себя приятную атмосферу и процесс работы будет очень приятным.

Инструменты и материалы

Чтобы сделать жука из бисера, вам понадобятся совсем простые материалы. Их легко можно найти в творческих магазинах.

Круглый бисер

Очень важно выбирать качественный бисер. Для этого подробно изучите популярных производителей.

В Японии выпускают самый качественный бисер. Он создается на высококачественном оборудовании и по новейшим технологиям. Совсем недавно японцы внедрили новую систему, которая позволяет из партии к партии выпускать ровный и однородный бисер. Стоит такой материал недешево, но опытных рукодельниц это не смущает, ведь готовые изделия они могут продать за большие деньги. Украшения из японского бисера приравниваются к произведениям искусства.

Чешский бисер немного отстает по качеству, но преуспевает в цветовой палитре. В каталоге вы можете найти как базовые, так экспериментальные и редкие цвета. Список часто обновляется, поэтому многие следят  за новинками, чтобы не упустить что-нибудь интересненькое.

Китайцы делают дешевый и менее качественный материал, но он также пользуется спросом на рынке. Это отличный вариант для начинающих, которые только хотят себя попробовать в бисероплетении. Бисеринки разнятся по внутреннему отверстию и по размеру в целом. Но большая цветовая палитра позволяет реализовать любые задумки.

Стеклярус

Это полые трубочки, которые могут быть в длину от нескольких миллиметров до пары сантиметров. Официально это раздел бисера, но стеклярус стал настолько популярным, что его поместили в отдельный класс. Сначала этот необычный материал использовали для украшения обоев зажиточных людей. Но со временем поняли, что стеклянные трубочки могут дать интересный эффект в разных поделках. На рынке можно найти огромный выбор фактуры и поверхности.

Бусины

Для создания акцента в поделке выбирают бусины. Они больше бисера по размеру и имеют разную поверхность. У мухи из бисера можно сделать глазки с помощью бусин.

Несколько самых распространенных покрытий и фактуры:

• глянцевые;
• матовые;
• радужные;
• перламутровые;
• жемчужные;
• прозрачные;
• непрозрачные;
• деревянные;
• бензиновые;
• имитирующие дорогие камни;
• имитирующие золото и серебро;
• серебряные;
• прозрачные глянцевые.

Также для изготовления поделки вам понадобится:

• игла;
• проволока;
• леска;
• кусачки;
• ножницы;
• клей.

Популярные схемы и техники

Существуют различные схемы плетения насекомых из бисера. Мы постараемся рассказать о самых популярных.

Объемное

Объемные насекомые из бисера – самый распространенный вариант плетения. Получаются очень реалистичные букашки, которые можно использовать для разных целей. Схемы плетения объемных насекомых из бисера подойдут для начинающих. Техника очень похожа на плоское параллельное плетение, но ряды находятся друг над другом.

Параллельное

Еще один легкий мастер-класс насекомых из бисера – это параллельная техника. Она заключается в том, что концы лески пропускаются через бисер навстречу друг другу. Чаще всего таким образом создают листья, цветы и разных животных.

Мозаичное

Еще один интересный способ как сделать насекомых из бисера. Техника представляет собой нанизывание бисера на леску в шахматном порядке. В результате чего получается сплошное полотно, которое выглядит очень эффектно и аккуратно.

Схема плетения жука

Жуки из бисера станут интересной основой для украшений. Можно сделать брошку или кулончик.

Предлагаем рассмотреть схему жука из бисера:

• возьмите проволоку длиной 25 см;
• начните с усиков жучка из бисера;
• для этого добавьте на проволоку одну бусину;
• скрутите пару раз проволоку, сделав столбик;
• добавьте еще 3 бусины;
• затем еще одну и снова скрутите столбик как на схеме;
• наберите на один конец 6 бусин;
• пропустите проволоку в противоположном направлении;
• таким способом плетется все туловище;
• из другого отрезка проволоки сделайте крылышки;
• для этого нанизываются 8 бусин красного цвета;
• через 5 бусин продевается проволока в обратном направлении и затягивается;
• получается колечко;
• далее добавляются дуги;
• прикрепите крылышки к туловищу.

Источник фото: http://static.biserok.org/wp-content/uploads/2010/03/pauk-iz-bisera.jpg

Источник фото: https://rukodelnichaem.ru/wp-content/uploads/bogya_korovka_12.jpg

Теперь вы знаете как сплести жука из бисера, рассмотрим других насекомых.

Как сплести муху

Рассмотрим схему мухи из бисера:

• плетение начинается с хвоста;
• после 5, 6 и 7 ряда наберите по 6-8 бисеринок для лапок;
• для крыльев возьмите прозрачные бусины;
• на отдельном отрезки проволоки сделайте крыло;
• прикрепите крылья к туловищу;
• носик можно сделать с помощью конусного бисера.

Источник фото: https://www.toysew.ru/wp-content/uploads/2015/08/muha.jpg

Шмель из бисера

У каждой девочки в коробочке с украшениями должен быть шмель из бисера. Он дополняет любой образ и придает нотку романтичности. Вот схема:

• шмель плетется в объемной технике;
• начинайте делать с головы, переходя к туловищу;
• для этого на проволоку добавьте 34 бусины;
• из 7 бусин сделайте петлю;
• петля и проволока должны образовывать прямой угол;
• далее делайте петлю из 12 бисеринок;
• таким образом создается полностью туловище;
• крылья делаются из отдельного отрезка проволоки;
• скрипте все элементы.

Источник фото: http://izbisera.ru/sites/default/files/shmel-iz-bisera-shema.jpg

Объемный кузнечик

Кузнечика из бисера своими руками можно создать вместе с ребенком. Это будет отличная поделка для детского садика или школы.

Следуйте схеме плетения кузнечика из бисера:

• начинайте плести с усиков;
• для этого на отрезок проволоки добавьте 12-15 бисеринок;
• перекрутите проволоку и добавьте 3 бусины;
• далее создайте симметричное усико;
• туловище плетется с помощью колец;
• создавая голову, добавляйте больше бисера на кольца;
• туловище должно быть ровным и меньше, чем голова;
• после 5,6 и 7 ряда по бокам приплетайте бусины для ножек;
• придайте ножкам и усикам форму.

Источник фото: http://book-hall.ru/files/kids-art-hands-made/p1040033.jpg

Советы по выполнению

Начинающим мастерицам нужно прислушаться к советам опытных рукодельниц, вот что они советуют:

• используйте качественный бисер;
• не смешивайте оттенки одного цвета;
• используйте плотную проволоку для выполнения лапок и усиков, чтобы можно было придать им форму;
• начинайте с простых схем;
• плоские изделия положите под пресс, чтобы они выпрямились;
• используйте специальную иголку для бисероплетения;
• если покупаете готовый набор, возьмите прозапас игл, так как они очень тонкие и могут сломаться;
• делайте перерыве между занятиями;
• работайте в дневное время или в хорошо освещенном месте.

Ирина Вышивайкина

Профессиональные навыки: Дизайнер одежды; Художник

Краткая биография и личные достижения: «Я вдохновляюсь вещами, которые находятся вокруг нас». С детства интересовалась искусством и рукоделием, поэтому решила посвятить этому свою жизнь. Получила высшее образование в области дизайна, и выпустила коллекцию авторских украшений из простых материалов, которые можно найти дома у любой рукодельницы. После, решила проводить мастер-классы по созданию подобных аксессуаров для всех желающих. Стала блогером и автором сайта domigolki.ru.

Передовой опыт ручной нормализации концентраций библиотек

Нормализация библиотек — это процесс разбавления библиотек с переменной концентрацией до одинаковой концентрации перед волюметрическим объединением, обеспечивающий равномерное распределение показаний для всех образцов. Передовые методы нормализации можно использовать для подготовки любой библиотеки Illumina, требующей ручной нормализации. Шаги для нормализации:

1. Определите размер вашей библиотеки
2. Количественная оценка ваших библиотек
3. Планируйте расчеты разбавления
4. Пул нормализованных библиотек

Некоторые наборы для подготовки библиотек, такие как Nextera XT и Illumina DNA Prep, (M) Tagmentation (ранее известный как Nextera DNA Flex), предлагают подход к нормализации на основе гранул. Ручная нормализация не требуется, когда выполняется нормализация на основе шариков. Однако если вводимое количество меньше 100 нг для Illumina DNA Prep, (M) Tagmentation или конечный выход библиотеки меньше 10–15 нМ для Nextera XT, внутренняя нормализация несовместима. В этих ситуациях необходимо выполнить ручную нормализацию

Примечание : химические процессы нормализации гранул различаются в рабочих процессах Illumina DNA Prep, (M) Tagmentation и Nextera XT; из-за этой разницы процедуры денатурации и разбавления библиотеки перед секвенированием различаются. Обратитесь в службу технической поддержки Illumina ([email protected]) для получения дополнительной информации.

Определите размер вашей библиотеки

Подтвердите размер библиотеки, запустив образцы на биоанализаторе или анализаторе фрагментов. Этот шаг также позволяет увидеть возможные проблемы с библиотекой, такие как димеры адаптера или непредвиденные размеры библиотек.

Проведите количественный анализ ваших библиотек

Проведите количественный анализ библиотеки, используя рекомендуемый метод количественного определения, указанный в руководстве по подготовке библиотеки, кратко изложенный в бюллетене Краткое справочное руководство по количественному анализу и контролю качества библиотек.

Преобразуйте это значение из нг/мкл в нМ, используя средний размер библиотеки, полученный с помощью биоанализатора или анализатора фрагментов, и бюллетень «Преобразование нг/мкл в нМ при расчете концентрации библиотеки двухцепочечной ДНК».

Планирование расчетов разбавления

На этом этапе происходит нормализация концентрации. Разбавление может быть сделано с использованием воды молекулярной чистоты или 10 мМ Tris-HCl pH 8,5. Калькулятор объединения также можно использовать для расчета разведений библиотек, и его можно использовать, если библиотеки имеют одинаковую или разную концентрацию.

1. Определите общую концентрацию для разбавления библиотек для последующего применения. Для большинства платформ секвенирования Illumina 2–4 ​​нМ для каждой библиотеки является предпочтительной начальной концентрацией для рекомендаций по денатурации и разбавлению; обратитесь к соответствующим руководствам пользователя прибора для получения дополнительной информации.
2. Рассчитайте разведение библиотек, используя следующую формулу:

Для наиболее равномерного представления образцов и наиболее надежной плотности кластеров убедитесь, что все пипетированные объемы составляют не менее 2 мкл . Пипетирование менее 2 мкл может привести к значительным ошибкам концентрации. Скорректируйте расчеты, чтобы убедиться, что используются соответствующие объемы. Для высококонцентрированных библиотек используйте одну или несколько промежуточных концентраций.

Например, следующие расчеты демонстрируют, как развести 3 библиотеки (с разными начальными концентрациями 15 нМ, 20 нМ и 50 нМ) до конечной концентрации 4 нМ в конечном объеме 15 мкл для каждой библиотеки.

Начальная Концентрация	Объем исходной ДНК (для концентрации 4 нМ )	Объем разбавителя (для 15 мкл окончательный объем )
15 нМ	4 ул	11 ул
20 нМ	3 ул	12 ул
50 нМ*	1,2 ул	13,8 ул

* В примере библиотеки 50 нМ используется только 1,2 мкл исходной ДНК для разбавления библиотеки до 4 нМ. Для получения наиболее точных результатов необходимо промежуточное разведение 20 нМ для достижения объема пипетки не менее 2 мкл.

Промежуточное разбавление			Окончательное разбавление
Начальная концентрация	Объем исходной ДНК (для промежуточной концентрации 20 нМ )	Объем разбавителя (для объема 15 мкл)	Объем промежуточного продукта 20 нМ ДНК (для конечной концентрации 4 нМ	Объем разбавителя (для объема 15 мкл)
50 нМ	6 ул	9 ул	3 ул	12 ул

 

3. Разбавьте библиотеки в соответствии с приведенными выше расчетами. Библиотеки теперь нормализованы.

Объединение нормализованных библиотек

Объемное объединение: Объедините равные объемы каждой нормализованной библиотеки в микроцентрифужную пробирку и аккуратно перелейте содержимое пипеткой вверх и вниз 10 раз, чтобы тщательно перемешать.

Теперь нормализованный пул готов к денатурации и секвенированию. Подробные инструкции по процедурам денатурации см. в руководстве по денатурации и разбавлению соответствующего инструмента:

• Руководство по системе iSeq 100 с рекомендациями по разбавлению
• Руководство по денатурации и разбавлению библиотек системы MiniSeq
• Руководство по денатурации и разбавлению библиотек системы MiSeq
• NextSeq 500/550 System Руководство по денатурации и разбавлению библиотек
• Руководство по денатурации и разбавлению библиотек систем HiSeq
• Системное руководство cBot по денатурации и разбавлению библиотек для HiSeq 3000/4000 
• Руководство по системе секвенирования NextSeq 1000/2000 по денатурации и разбавлению библиотек на NextSeq 1000/2000
• Системное руководство NovaSeq по денатурации и разбавлению библиотек на NovaSeq

Импедиметрический иммуносенсор в пористом волюметрическом микрожидкостном детекторе

Sens Actuators B Chem. Авторская рукопись; доступно в PMC 2017 29 октября.

Опубликовано в окончательной редакции как:

Sens Actuators B Chem. 2016 29 октября; 234: 493–497.

Опубликовано в Интернете 6 мая 2016 г. doi: 10.1016/j.snb.2016.05.015

PMCID: PMC5053616

NIHMSID: NIHMS788546

PMID: 27721569

, ^a , ^b and ^{a, b, *}

Author information Copyright and License information Disclaimer

A sensitive and rapid impedemetric immunosensor is demonstrated с использованием пористых объемных микрожидкостных элементов обнаружения и зондов с золотыми наночастицами, усиленными серебром. Пористые элементы обнаружения значительно увеличивают плотность захвата зонда и уменьшают шкалу длины диффузии по сравнению с обычными планарными датчиками, чтобы повысить эффективность захвата цели и усилить сигнал импеданса. В этой работе уплотненный слой шариков кремнезема, функционализированных зондами антител, служит пористым сенсорным элементом в термопластическом микроканале, а микроматрица с встречно-штыревыми золотыми электродами используется для измерения изменений импеданса, вызванных зависимым от концентрации образованием агрегатов серебра. Измеренное изменение импеданса не зависит от расстояния между электродами, что позволяет устройству с электродами с низким разрешением достигать предела обнаружения сэндвич-иммуноанализа в пределах 1–10 нг/мл с 4-логарифмическим динамическим диапазоном при общем времени анализа 75 мин.

Ключевые слова: зондирование импеданса, кондуктометрия, иммуноанализ, наночастицы, усиление серебром

Обычные импедиметрические датчики используют макроскопические электроды, погруженные в раствор образца для измерения импеданса раствора в зависимости от концентрации биомолекул [1,2]. Совсем недавно в миниатюрных импедиметрических биосенсорах использовалась топология встречно-штыревой электродной матрицы (IDA), которая увеличивает площадь поверхности электрода и уменьшает расстояние между электродами [3–6], тем самым сокращая время анализа, пределы обнаружения и объем обнаружения по сравнению с макромасштабными электродами [5]. . С этими миниатюрными датчиками импеданс между парами IDA меняется по мере захвата биомаркеров на поверхности микроканала между электродами или на самой поверхности электрода. Таким образом, плотность зонда захвата ограничивается эффективностью функционализации зонда захвата и геометрией микроканала [7]. В частности, термопластичные поверхности, которые позволяют проводить недорогие одноразовые анализы, как правило, обладают низкой эффективностью функционализации из-за неэффективных иммобилизационных химических процессов [7,8]. Кроме того, электроды с высоким разрешением необходимы для концентрации электрического поля вблизи поверхности, где происходят события биораспознавания, чтобы максимизировать сигнал [4,6,9].]. Однако даже при использовании субмикрометровых электродов для импедиметрических иммуноанализов обычны относительно высокие пределы обнаружения порядка десятков мкг/мл [4].

Для повышения чувствительности наночастицы золота (AuNP) использовались в качестве активных компонентов в импедиметрических иммуноанализах на основе микролунок. Со вторичными антителами, прикрепленными к AuNP, иммуноконъюгаты золота связываются с мишенью, захваченной на функционализированной поверхности, тем самым изменяя импеданс, измеренный на нижележащих электродах. Например, с помощью этого подхода для метамфетамина был продемонстрирован предел обнаружения около 50 нг/мл и 1 логарифмический динамический диапазон [10]. В другой работе AuNP сочетались с усилением серебром. В присутствии золота и восстановителя ионы серебра зарождаются на НЧ Au, образуя большие проводящие агрегаты [11]. Используя этот подход, были описаны различные сэндвич-анализы с микролунками, в которых прямой путь проводимости серебра формируется между соседними парами электродов [12–14]. Однако эти анализы требуют нескольких этапов роста серебра для количественного определения, предлагают ограниченный динамический диапазон и требуют длительного времени роста серебра с использованием электродов с высоким разрешением (6 мкм) для получения низких пределов обнаружения [13]. Кроме того, формат микролунок запрещает автоматизацию без использования роботизированной обработки для выполнения всех этапов анализа. В то время как различные полуавтоматические микрофлюидные оптические биосенсоры были продемонстрированы с использованием усиления серебром [15–18], использование AuNP и роста серебра для повышения производительности микрофлюидных импедиметрических биосенсоров остается неизученным.

Здесь мы сообщаем о проточном микрожидкостном импедиметрическом иммуносенсоре, использующем иммунокомплексы AuNP, способном к количественному считыванию с высокой чувствительностью и динамическим диапазоном. Ключевым достижением настоящей работы является использование пористой матрицы для захвата молекул-мишеней в трехмерном объеме. Эта стратегия была первоначально разработана для увеличения плотности мест реакции и уменьшения масштабов длины диффузии для оптического биосенсора [18,19], тем самым улучшая как время анализа, так и чувствительность. При переходе от плоской системы () к объемному формату объем жидкости, в котором происходит биосенсор, значительно увеличивается. Кроме того, использование объемного зондирования может ослабить ограничения на разрешение электрода, потенциально позволяя использовать нефотолитографические методы, подходящие для изготовления с высокой производительностью. Здесь мы исследуем эту концепцию посредством изготовления и характеристики термопластичных микрофлюидных чипов, содержащих IDA низкого разрешения с интервалом 100 мкм и функционализированные шарики кремнезема в качестве пористой матрицы для объемного обнаружения (). Гранулы диоксида кремния функционализированы вне кристалла и вводятся в виде уплотненного слоя перед выполнением анализа. Используя этот подход, продемонстрирован сэндвич-иммуноанализ с пределом обнаружения между 1–10 нг/мл и динамическим диапазоном 4 log.

Открыть в отдельном окне

Идеализированные виды плоскостного (а) и объемного (б) импедиметрического иммуносенсора. (c) Изготовленное термопластичное устройство и (d) увеличенное изображение зоны обнаружения, включая тонкопленочную золотую IDA и уплотненный слой шариков функционализированного кремнезема в канале глубиной 150 мкм.

Материалы

Цитрат натрия, этанол, гидрохинон, фосфатно-солевой буфер (PBS), бычий сывороточный альбумин (BSA), 4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфоновая кислота (HEPES), твин 20, (3-аминопропил) триэтоксисилан (APTES) и человеческий IgG были приобретены у Sigma-Aldrich (Сент-Луис, Миссури). Бис(сульфосукцинимидил)суберат (BS3) и декагидронафталин (декалин) были приобретены у Thermo Fisher Scientific (Rockford, IL). Негативный фоторезист NR1-3000PY и проявитель RD-6 были приобретены у Futurrex Inc. (Франклин, Нью-Джерси). Раствор для усиления серебра, античеловеческий IgG (кролик-хозяин) и 40-нм AuNP, меченные антикроличьим IgG, были приобретены у Cytodiagnostics (Берлингтон, Онтарио). Ацетат серебра был приобретен у компании Carolina Biological Supply Co. (Берлингтон, Северная Каролина). Гранулы кремнезема (диаметром 20 мкм) были приобретены у Corpuscular Inc. (Cold Spring, NY). Микрожидкостные фитинги были приобретены у IDEX Health & Science (Оук-Харбор, Вашингтон), а трубки для игл были приобретены у Hamilton Syringe (Рено, Невада).

Изготовление устройства

Термопластичные пластины, изготовленные из смолы циклического олефинового полимера (ЦОП) (Zeonor 1020R, Zeon Chemicals, Луисвилл, Кентукки), разрезали на квадратные кусочки перед промывкой метанолом, изопропанолом и деионизированной водой (ДИ), а затем N ₂ сушка и дегазация в течение ночи при 75 °C. Встречноштыревые электроды были сформированы с использованием процесса отрыва, при этом слой Cr/Au толщиной 200 нм был нанесен путем электронно-лучевого испарения на узорчатый негативный фоторезист с последующим удалением фоторезиста в ацетоне для получения встречно-штыревых электродных массивов, состоящих из пальцев шириной 10 мкм с 10–200 Расстояние между соседними пальцами в мкм. Затем сопрягаемую подложку COP измельчали ​​для определения микроканалов шириной 350 мкм и глубиной 150 мкм с использованием фрезерного станка с ЧПУ (MDX-650, Roland DGA, Ирвин, Калифорния). Оба субстрата промывали метанолом, изопропанолом и DI перед N ₂ сушка и дегазация в течение ночи при температуре 75 °C, а также склеивание с использованием жидкофазного процесса склеивания декалина с растворителем [20]. После воздействия смеси декалин/этанол подложки промывали этанолом и газообразным азотом и вручную выравнивали перед прижатием сопряжения вручную. Затем многослойный чип прессовали под давлением 200 фунтов на кв. дюйм при температуре 30 °C в горячем прессе (AutoFour/15, Carver, Wabash, IN) для завершения склеивания. Жидкостные интерфейсы для неоригинальных шприцевых насосов были созданы путем вставки сегментов игольчатых трубок в порты доступа в соответствии с ранее описанным методом [21] и присоединения жидкостных фитингов после формирования уплотненного слоя.

Процедура иммунологического анализа

Гранулы кремнезема в 5% мас. водный раствор функционализировали аминогруппами на основе ранее описанного метода [22]. Шарики промывали в растворе пираньи в течение 1 часа и промывали 3 раза деионизированным раствором и этанолом. Аминовые группы вводили путем инкубации гранул в растворе 5% APTES, 5% DI и 90% этанола (об./об.) при перемешивании в течение 1 часа при комнатной температуре и 3 раза промывали этанолом и PBS. Человеческий IgG присоединяли к шарикам с помощью BS3, гомобифункционального аминореактивного сшивающего агента, путем объединения 900 мкл 50 мкг/мл IgG человека в PBS, 100 мкл раствора шариков и 35 мкл 7,19 мМ BS3 в DI и инкубации 30 мин при перемешивании при комнатной температуре. Контрольные шарики функционализировали путем замены человеческого IgG на 2 мг/мл BSA в PBS. Реакцию гасили добавлением 100 мкл 1 М трис-буфера перед перемешиванием в течение 15 минут при комнатной температуре. Полученную смесь промывали 3 раза PBS и суспендировали в 2 мг/мл BSA в PBS в течение ночи при 4°C. Функционализированные шарики помещали в микрожидкостное устройство с помощью вакуума через боковой канал доступа в ограниченную чувствительную область с помощью шприца и иглы в выходном отверстии для жидкости. Все чипы хранились при температуре 4 °C, а испытания проводились в течение 24 часов после изготовления.

Устройства промывали 2 мг/мл BSA в PBS в течение 15 минут перед инфузией серийных разведений античеловеческого кроличьего IgG (0,01–10 мкг/мл) и 2 мг/мл BSA (контроль) в PBS в течение 15 минут с последующим путем 15-минутного полоскания PBS. Затем наночастицы золота размером 40 нм, функционализированные антикроличьим IgG, разбавленным 1:50 (об./об.) в 1% BSA и 0,05% Tween 20 в буфере HEPES, инфузировали в течение 15 минут с последующим 15-минутным промыванием PBS. Раствор для усиления серебра был приготовлен с использованием двухкомпонентной смеси [23], выбранной из-за ее стабильности при воздействии света, состоящей из 5,0 мг ацетата серебра в 5 мл DI и 6,25 мг гидрохинона в цитратном буфере при pH 3,8. Растворы для усиления серебра объединяли в нестандартном соединении и вливали в течение 15 минут с последующим 15-минутным промыванием PBS.

Электрические соединения были выполнены с использованием лунок диаметром 1 мм, сформированных в слое, покрывающем чипы, перед склеиванием, что обеспечило доступ к слою металлизации с помощью внешних зондов. Во время тестирования датчики были подключены к измерителю LCR, и измерения импеданса проводились с использованием синусоидального входа с амплитудой 50 мВ на частоте 1 кГц. Величину импеданса измеряли во время активного промывания PBS до (Z ₀ ) и после (Z) усиления серебром. Результат анализа определяли по нормализованному изменению импеданса (Z ₀ −Z)/Z ₀ , с минимальным уровнем шума, определенным с использованием отрицательного контроля (только BSA) как 3σ выше контрольного среднего. Для всех устройств, используемых во время оценки сэндвич-анализа, IDA состоял из 6 электродов, каждый шириной 10 мкм и расположенных на расстоянии 100 мкм друг от друга.

На рис. Электроды остались неповрежденными во время склеивания, что позволило избежать проблем с разрывами электродов, о которых сообщалось в других термопластических микрожидкостных процессах склеивания [24]. На основе конструкции микросхемы была разработана модель эквивалентной схемы для объемного датчика (). Общий объем, зондируемый электрическим полем, определяется геометрией встречно-штыревой электродной решетки. Примерно 95% от общего тока, проходящего между электродами, проходит в пределах высоты, эквивалентной межцентровому расстоянию между каждой парой электродов [9]. Таким образом, для данного случая массива электродов шириной 10 мкм, расположенных на расстоянии 100 мкм друг от друга, почти весь ток проходит через канал высотой 150 мкм непосредственно над массивом электродов. Вклад в импеданс в пределах этого объема выборки состоит из емкости двойного слоя на границе между электродами и буферным раствором (C _e ), объемная емкость (C _s ), связанная с образованием двойного электрического слоя на поверхности кластера серебра, сопротивление переносу заряда (R _s ), связанное с движением носителей заряда между ионным раствором и кластером серебра поверхности, последовательное сопротивление буферного раствора между дискретными кластерами серебра (R _sb ) и дополнительное сопротивление, отражающее параллельный путь тока через буфер, связанный с прямым транспортом ионов между электродами без взаимодействия кластеров серебра (R _б ). Модель эквивалентной схемы приводит к системе с двумя нулями и двумя полюсами. На низких частотах в импедансе преобладает емкость двойного слоя электрода (C _e ), в то время как на высоких частотах преобладает объемное буферное сопротивление (R _b ). Пара полюс/ноль вводится на промежуточных частотах, расположение которых зависит от всех параметров системы. В целом рост серебра приводит к уменьшению импеданса, связанному с емкостью двойного слоя (C _s ) и сопротивление переносу заряда (R _s ) кластеров серебра. По мере роста кластеров серебра на конъюгатах AuNP-антитело во время этапа усиления серебром угловая частота, связанная с промежуточным полюсом, снижается, что приводит к более низкому импедансу на частотах между полюсом и более высокой нулевой частотой. Поскольку плотность агрегатов серебра пропорциональна концентрации захваченных конъюгатов AuNP-антитело, общее снижение импеданса на промежуточных частотах коррелирует с целевой концентрацией. Это поведение можно увидеть на , где представлены смоделированные спектры импеданса с различными значениями C _s , отражающие рост кластеров серебра, вместе с экспериментальными кривыми импеданса, полученными во время сэндвич-иммуноанализа с целевой концентрацией 100 нг/мл.

Открыть в отдельном окне

(a) Эквивалентная модель схемы для пористой объемной сенсорной платформы. (b) Сравнение модельных и экспериментальных спектров импеданса до и после амплификации серебром при концентрации образца 100 нг/мл.

Сэндвич-иммуноанализ был проведен для оценки эффективности метода объемного импедиметрического обнаружения с использованием чипа, содержащего уплотненный слой микросфер кремнезема размером 20 мкм, функционализированных за пределами чипа человеческим IgG в качестве зонда захвата. Прежде чем окончательно определить расстояние между электродами для чипов для иммунологического анализа, сначала оценили влияние геометрии электродов на характеристики датчика с использованием встречно-штыревых массивов электродов шириной 10 мкм, расположенных на расстоянии 15, 40 и 100 мкм друг от друга в канале глубиной 150 мкм, с гранулами кремнезема, функционализированными непосредственно. с антителами к IgG кролика человека. Растворы 13 фМ AuNP-IgG вводили в течение 15 минут перед усилением серебром. Было обнаружено, что относительное изменение импеданса с поправкой на фон не зависит от расстояния между электродами (данные не показаны), что подтверждает, что изменение импеданса не зависит от конфигурации электродов при условии, что микроканал достаточно высок, чтобы удерживать генерируемое электрическое поле. Таким образом, для дальнейших экспериментов было выбрано наибольшее расстояние 100 мкм.

Для экспериментов по иммуноанализу после инфузии античеловеческих кроличьих IgG в различных уровнях разведения вводили конъюгаты AuNP-антикроличьи. После усиления серебром были выполнены измерения импеданса с использованием синусоидального входа с амплитудой 50 мВ на частоте 1 кГц. Было обнаружено, что эта частота лежит между промежуточной парой полюс/ноль, описываемой моделью с сосредоточенными параметрами, но значительно ниже высокочастотного нуля, определяющего верхнюю угловую частоту приблизительно 50 кГц для тестируемых устройств (1). Амплитуда напряжения была достаточно низкой, чтобы предотвратить образование пузырьков при электролизе. Никаких изменений внешнего вида или сигнала импеданса не наблюдалось после захвата только AuNP. После усиления серебром слой шариков пористого кремнезема изменил цвет с белого на красно-коричневый цвет для всех положительных тестовых образцов, как и ожидалось, исходя из результатов предыдущих исследований оптического обнаружения [25].

Результирующие измерения изменения импеданса с поправкой на фон после 15-минутного усиления серебром представлены в . На основании этих данных был достигнут предел обнаружения в пределах 1–10 нг/мл с динамическим диапазоном не менее 4 логарифмов на основе консервативного определения минимального уровня шума, основанного на среднем изменении импеданса для контрольного теста (только BSA) плюс 3σ. Измерения при 1 нг/мл оставались отличными от контрольного среднего значения. Продемонстрированный предел обнаружения значительно ниже, чем у ранее описанных импедиметрических биосенсоров, использующих плоские поверхности захвата без амплификации серебром, которые обычно находятся в диапазоне мкг/мл [4], и выгодно отличается от импедиметрических сенсоров на основе микролунок, использующих амплификацию серебром, предлагающих неколичественный анализ. показания [12,14]. Полный анализ, включая все этапы инкубации и промывки, был завершен менее чем за 75 минут за счет ограничения времени роста серебра до 15 минут.

Открыть в отдельном окне

Сэндвич-анализ с использованием слоя шариков кремнезема с зазором между электродами 100 мкм. Нормализованное и скорректированное по фону изменение импеданса измеряли на частоте 1 кГц для каждой концентрации мишени IgG (n ≥ 3, планки ошибок +/- 1σ). Фон определяется как средний управляющий сигнал плюс 3σ.

Несмотря на то, что в этой работе для формирования рисунка электродов использовалась обработка методом отрыва, следует отметить, что объемные детекторные элементы позволяют использовать электроды с низким разрешением, которые могут быть экономично изготовлены с использованием нефотолитографических процессов. Например, прямая печать электродов с элементами размером 100 мкм может быть легко достигнута с использованием высокопроизводительного прямого нанесения с рулона на рулон, трафаретной печати и аналогичных методов обработки больших площадей [26,27]. Кроме того, поскольку гранулы кремнезема функционализированы вне чипа и упакованы в устройство после соединения, нет необходимости выполнять серийную функционализацию отдельных устройств, как это требуется для планарных биосенсоров. Этот аспект изготовления устройств предлагает дополнительный потенциал для улучшения технологичности импедиметрических биосенсоров, а также позволяет реализовать мультиплексированные чипы, просто упаковав несколько слоев шариков с разными целевыми зондами.

В этой работе описывается разработка проточных импедиметрических иммуносенсоров, использующих преимущества селективного захвата AuNP и амплификации серебра в пористых микрофлюидных элементах, что позволяет проводить быстрые, чувствительные и поддающиеся количественному измерению измерения целевого аналита в зонах объемного обнаружения. Сэндвич-анализ, используемый для характеристики работы сенсора, достиг консервативного предела обнаружения 10 нг/мл для модельной системы IgG. За счет использования коротких шкал длины диффузии, присущих пористым детектирующим элементам, сэндвич-анализ требовал только 15-минутного усиления серебром при общем времени анализа примерно 75 минут, что выгодно отличает его от обычных планарных иммуноанализов, требующих времени анализа 2–3 часа. Использование электродов с низким разрешением, обеспечиваемое объемной схемой обнаружения, делает этот метод пригодным для изготовления устройств с использованием недорогих производственных технологий. Кроме того, устройства из термопластика можно использовать в портативных системах, требующих для измерения только низкочастотный омметр, что предлагает большой потенциал для применения в тестировании в месте оказания медицинской помощи и за его пределами.

Благодарим за поддержку Национальный институт здравоохранения в виде гранта R01AI096215 и Национальный научный фонд в рамках гранта DGE1322106.

Правовая оговорка издателя: Это PDF-файл неотредактированной рукописи, принятой к публикации. В качестве услуги нашим клиентам мы предоставляем эту раннюю версию рукописи. Рукопись будет подвергнута редактированию, набору текста и рецензированию полученного доказательства, прежде чем она будет опубликована в ее окончательной цитируемой форме. Обратите внимание, что в процессе производства могут быть обнаружены ошибки, которые могут повлиять на содержание, и все правовые оговорки, применимые к журналу, относятся к нему.

1. Towe BC, Pizziconi VB. Микропоточный амперометрический биосенсор глюкозы. Биосенс. Биоэлектрон. 1997; 12: 893–899. [PubMed] [Google Scholar]

2. Berggren C, Stalhandske P, Brundell J, Johansson G. Технико-экономическое обоснование емкостного биосенсора для прямого обнаружения гибридизации ДНК. Электроанализ. 1999; 11: 156–160. [Google Scholar]

3. Yang L, Li Y, Griffis CL, Johnson MG. Датчик импеданса с встречно-штыревым микроэлектродом (IME) для обнаружения жизнеспособной Salmonella typhimurium. Биосенс. Биоэлектрон. 2004;19: 1139–1147. [PubMed] [Google Scholar]

4. Zou Z, Kai J, Rust MJ, Han J, Ahn CH. Функциональные массивы встречно-штыревых наноэлектродов на полимере со встроенной микрожидкостной системой для прямого определения биологического сродства с использованием импедиметрических измерений. Датчики Приводы A Физ. 2007; 136: 518–526. [Google Scholar]

5. Yan X-F, Wang M-H, Dong A. Прогресс иммуносенсора импеданса на основе встречно-штыревых микроэлектродов. Китайский Дж. Анал. хим. 2011;39:1601–1610. [Google Scholar]

6. X Z, CH A. Электрохимическое определение обратимых окислительно-восстановительных соединений на встречно-штыревых микро/наноэлектродах с использованием метода инжекции заряда. IEEE транс. Нанобиология. 2005: 164–169. [PubMed] [Google Scholar]

7. Ooi HW, Cooper SJ, Huang CY, Jennins D, Chung E, Maeji NJ, et al. Координационные комплексы как молекулярный клей для иммобилизации антител на поверхности сополимеров циклических олефинов. Анальный. Биохим. 2014; 456:6–13. [PubMed] [Google Scholar]

8. Varshney M, Li Y, Srinivasan B, Tung S. Биосенсор импеданса на основе микрофлюидных и встречно-штыревых микроэлектродов без меток в сочетании с иммуносепарацией наночастиц для обнаружения Escherichia coli O157: H7 в образцах пищевых продуктов. Датчики Приводы B Chem. 2007;128:99–107. [Google Scholar]

9. Van Gerwen P, Laureyn W, Laureys W, Huyberechts G, Op De Beeck M, Baert K, et al. Наноразмерные массивы встречно-штыревых электродов для биохимических сенсоров. Датчики Приводы B Chem. 1998; 49:73–80. [Google Scholar]

10. Yeh C-H, Wang W-T, Shen P-L, Lin Y-C. Разработан конкурентный иммуноанализ, основанный на измерении импеданса для обнаружения метамфетамина. Микрофлюид. Нанофлюидика. 2012;13:319–329. [Google Scholar]

11. Liu R, Zhang Y, Zhang S, Qiu W, Gao Y. Серебряное усиление наночастиц золота для биосенсорного анализа от качественного к количественному. заявл. Спектроск. Ред. 2014; 49: 121–138. [Google Scholar]

12. Yeh C-H, Huang H-H, Chang T-C, Lin H-P, Lin Y-C. Использование электромикрочипа, зонда из нанозолота и усиления серебром в иммуноанализе. Биосенс. Биоэлектрон. 2009; 24:1661–1666. [PubMed] [Google Scholar]

13. Liu Y, Zhang D, Alocilja EC, Chakrabartty S. Обнаружение биомолекул с использованием биочипа на основе золотых наночастиц, усиленного серебром. Наномасштаб Res. лат. 2010;5:533–538. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

14. Lei KF. Электрическая детекция сэндвич-иммуноанализа на встречно-штыревых электродах из оксида индия и олова. Микро Нано Летт. 2011;6:157. [Академия Google]

15. Chin CD, Laksanasopin T, Cheung YK, Steinmiller D, Linder V, Parsa H, et al. Микрофлюидная диагностика инфекционных заболеваний в развивающихся странах. Нац. Мед. 2011;17:1015–1019. [PubMed] [Google Scholar]

16. Laksanasopin T, Guo TW, Nayak S, Sridhara AA, Xie S, Olowookere OO и соавт. Донгл для смартфона для диагностики инфекционных заболеваний на месте оказания медицинской помощи. науч. Перевод Мед. 2015;7 [PubMed] [Google Scholar]

17. Лей К.Ф., Вонг К.С. Автоматизированная микросистема колориметрического иммуноанализа для клинической диагностики. Инструм. науч. Технол. 2010;38:295–304. [Google Scholar]

18. Wiederoder MS, Peterken L, Lu AX, Rahmanian OD, Raghavan SR, DeVoe DL. Улучшение оптического обнаружения в пористых объемных микрофлюидных элементах захвата с использованием жидкостей, согласующих показатель преломления. Аналитик. 2015;140:5724–5731. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

19. Liu J, Chen C-F, Chang C-W, DeVoe DL. Проточные иммуносенсоры с использованием полимерных монолитов с иммобилизованными антителами. Биосенс. Биоэлектрон. 2010;26:182–188. http://www.pubmedcentral.nih.gov/articlerender.fcgi?artid=2939273&tool=pmcentrez&rendertype=abstract. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

20. Wallow TI, Morales AM, Simmons BA, Hunter MC, Krafcik KL, Domeier LA, et al. Высокопрочное соединение термопластичных микрофлюидных устройств с низким уровнем искажений с использованием диффузионно-опосредованной активации в случае II. Лабораторный чип. 2007; 7: 1825–1831. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18030407. [PubMed] [Google Scholar]

21. Chen CF, Liu J, Hromada LP, Tsao C-WW, Chang CC, DeVoe DL. Интерфейс иглы высокого давления для термопластичной микрофлюидики. Лабораторный чип. 2009 г.;9:50–55. http://eutils.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/eutils/elink.fcgi?dbfrom=pubmed&i=19209335&retmode=ref&cmd=p rlinks. [PubMed] [Google Scholar]

22. Wang Z-H, Jin G. Ковалентная иммобилизация белков для биосенсора на основе эллипсометрии изображений. Дж. Иммунол. Методы. 2004; 285: 237–243. [PubMed] [Google Scholar]

23. Hacker GW, Grimelius L, Danscher G, Bernatzky G, Mussl W, Adam H, et al. Аутометаллография с ацетатом серебра: альтернативный метод усиления для окрашивания иммунозолота-серебра (IGSS) и амплификации золота, серебра, ртути и цинка серебром в тканях. J. Гистотехнология. 1988;11:213–221. [Google Scholar]

24. Калбертсон К.Т., Миклбург Т.Г., Стюарт-Джеймс С.А., Селленс К.А., Прессналл М. Микросистемы тотального анализа: фундаментальные достижения и биологические приложения. Анальный. хим. 2014; 86: 95–118. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

25. Taton Ta, Mirkin CA, Letsinger RL. Сканометрическое обнаружение массива ДНК с помощью зондов наночастиц. Наука (80-.) 2000; 289: 1757–1760. [PubMed] [Google Scholar]

26. Дэниел Дж. Печатная электроника: технологии, проблемы и приложения.