Фигуры из бисера объемные: красивые объемные фигурки из бисера схемы: 24 тис. зображень знайдено в Яндекс.Зображеннях

Объемные снежинки из бумаги своими руками, 11 мастер-классов

Отлично передадут зимнюю сказочную атмосферу снежинки. Чтобы они смотрелись эффектно, сделайте их объёмными. В этой статье мы рассмотрим: как сделать объёмные снежинки из бумаги своими руками.

Содержание

• 1 Блестящая снежинка
  • 1.1 Мастер-класс
• 2 Изысканная снежинка
  • 2.1 Мастер-класс
• 3 Красивая снежинка
  • 3.1 Мастер-класс
• 4 3D снежинка с ёлочками
  • 4.1 Мастер-класс
• 5 Оригинальная снежинка
  • 5.1 Мастер-класс
• 6 Объёмная снежинка
  • 6.1 Мастер-класс
• 7 Геометрическая снежинка
  • 7.1 Мастер-класс
• 8 Объёмная снежинка из составных частей
  • 8.1 Мастер-класс
• 9 Объёмная снежинка из полос бумаги
  • 9.1 Мастер-класс
• 10 Креативная снежинка
  • 10.1 Мастер-класс
• 11 Снежинка в технике модульного оригами
  • 11. 1 Мастер-класс

Блестящая снежинка

Вам понадобится: блестящий картон голубого и фиолетового цвета, канцелярский ножик, клеевой пистолет, линейка, простой карандаш, зубочистка.

Мастер-класс

1. Нарежьте блестящий картон на полосы (по 3 полоски каждого цвета) размером 14х2,5 см. Всего должно быть 6 полос.
2. Начертите 4 линии на обратной стороне каждой полосы.
3. Прорежьте полосы канцелярским ножиком.
4. Сформируйте заготовки, используя термопистолет и зубочистку, как показано на фото-инструкции.
5. Вырежьте круг из картона, затем приклейте 6 заготовок по кругу, чередуя цвета.

Блестящая объёмная снежинка готова!

Изысканная снежинка

Вам понадобится: 6 голубых квадратных листов, 6 белых квадратных листов, голубой бумажный кружок, клей пва, страза.

Мастер-класс

1. Сложите лист голубой бумаги по диагонали.
2. Разверните квадрат и сложите боковые стороны к центральному сгибу.
3. Переверните заготовку на другую сторону.
4. Согните боковые стороны к центру, чтобы получилась форма ромба.
5. Переверните заготовку на другую сторону.
6. Отогните в стороны верхние слои.
7. Сложите ещё 5 голубых модулей таким же способом.
8. Сложите белый лист по диагонали с двух сторон, затем разверните.
9. Загните углы квадрата в центр и переверните на другую сторону.
10. Загните боковые стороны в центр.
11. Отверните боковые отверстия с обратной стороны модуля.
12. Загните в центр боковые стороны.
13. Сложите ещё 5 белых модулей таким же способом.
14. Приклейте на круг 2 голубых модуля напротив друг друга.
15. Приклейте 4 голубых модуля.
16. Приклейте белые модули на голубые, располагая их в шахматном порядке.
17. Приклейте в центр стразу.

Изысканная объёмная снежинка из бумаги готова! Рекомендую к просмотру данное видео!

СНЕЖИНКИ — ПУШИНКИ из бумаги / Новогодние УКРАШЕНИЯ

Watch this video on YouTube

Красивая снежинка

Вам понадобится: 2 квадратных листа голубой бумаги, ножницы, клей-карандаш, простой карандаш, страза.

Мастер-класс

1. Сложите квадратный лист по диагонали.
2. Сложите ещё дважды.
3. Нарисуйте 3 линии, по которым будут проходить разрезы. Не прорезайте до конца в месте сгиба, так как это центр снежинки.
4. Прорежьте по линиям.
5. Сделайте треугольные прорези внизу заготовки.
6. Разверните заготовку.
7. Загните и приклейте в центре средние полосы каждого лучика.
8. Сделайте вторую заготовку таким же способом.
9. Склейте заготовки между собой таким образом, чтобы лучики располагались в шахматном порядке.
10. Приклейте в центр стразу.

Красивая объёмная снежинка из бумаги готова! Рекомендую к просмотру данное видео!

Объемная СНЕЖИНКА из бумаги ❄ Поделки на Новый Год

Watch this video on YouTube

3D снежинка с ёлочками

Вам понадобится: 6 листов зелёного цвета размером 8х8 см, ножницы, простой карандаш, клей карандаш, страза.

Мастер-класс

1. Сложите лист бумаги пополам в поперечном направлении.
2. Нарисуйте карандашом 3 линии и половинку ёлочки.
3. Вырежьте заготовку по намеченным линиям.
4. Разверните заготовку.
5. Загните на себя центральную полоску и зафиксируйте клеем.
6. Сделайте ещё 5 заготовок таким же способом.
7. Соедините 2 заготовки между собой, расположив их немного внахлёст, затем зафиксируйте клеем.
8. Склейте 6 частей таким образом.
9. Приклейте в центр стразу.

Объёмная снежинка с ёлочками готова! Рекомендую к просмотру данное видео!

Как сделать объемную снежинку из бумаги!

Watch this video on YouTube

Оригинальная снежинка

Вам понадобится: 2 листа жёлтой бумаги формата А4, ножницы, простой карандаш, белые нитки, клей-карандаш.

Мастер-класс

1. Возьмите лист бумаги и сложите гармошку.
2. Обозначьте карандашом центр.
3. Нарисуйте по 3 треугольника в каждой стороне, закруглите края и вырежьте.
4. Проделайте те же самые функции со вторым листом.
5. Свяжите между собой 2 гармошки.
6. Расправьте гармошки, формируя круг.
7. Склейте 4 части между собой.

Оригинальная объёмная снежинка из бумаги готова! Рекомендую к просмотру данное видео!

ОБЪЕМНАЯ СНЕЖИНКА из бумаги своими руками Мастер класс

Watch this video on YouTube

Объёмная снежинка

Вам понадобится: белая и голубая бумага, ножницы, линейка, клей-карандаш, элементы декорирования – паетки, бусинки, цветочки…

Мастер-класс

1. Нарежьте 5 белых длинных полос, 10 голубых полос среднего размера и 10 белых полос ещё меньшего размера.
2. Склейте концы полос.
3. Соберите часть снежинки из 5 полос, как показано на изображении.
4. Соберите снежинку из 5 частей.
5. Приклейте в центр украшение.

Объёмная снежинка из бумаги готова! Рекомендую к просмотру данное видео!

Объемная СНЕЖИНКА своими руками за 15 минут.

Watch this video on YouTube

Геометрическая снежинка

Вам понадобится: 2 листа цветной бумаги, ножницы, клей-карандаш.

Мастер-класс

1. Разрежьте каждый лист на 3 равных части.
2. Возьмите одну часть и сложите пополам.
3. Сделайте 4 надреза: 2 коротких и 2 длинных.
4. Распределите центральные полосы по противоположным сторонам.
5. Повторите этот процесс со всеми заготовками.
6. Склейте заготовки, между собой чередуя цвета сформировав снежинку.

Геометрическая снежинка готова! Рекомендую к просмотру данное видео!

Поделки к Новому году: Геометрическая снежинка

Watch this video on YouTube

Рекомендую к просмотру данное видео!

Объёмная снежинка из составных частей

Вам понадобится: 6 квадратных листов бумаги, ножницы, клей.

Мастер-класс

1. Возьмите лист сложите его по диагонали, затем пополам.
2. Сделайте 3 надреза и разверните заготовку.
3. Склейте концы самых маленьких полос, затем через одну полосу с каждой стороны склейте другие.
4. Соедините таким же образом, оставшиеся полосы с другой стороны.
5. Повторите этот процесс с остальными листами, затем соберите снежинку, склеив 6 заготовок между собой.

Снежинка из составных частей готова! Рекомендую к просмотру данное видео!

Как сделать БОЛЬШУЮ НОВОГОДНЮЮ СНЕЖИНКУ

Watch this video on YouTube

Объёмная снежинка из полос бумаги

Вам понадобится: бумага. ножницы, линейка, клей.

Мастер-класс

1. Нарежьте бумагу на 10 тонких полосок одного размера.
2. Выложите на ровной поверхности 5 полос, затем выложите остальные 5 в шахматном порядке.
3. Склейте между собой концы полосок расположенных рядом по углам. Обратите внимание, что 4 полоски «крест» должен остаться.
4. Сделайте вторую заготовку таким же образом.
5. Склейте заготовки, между собой сформировав снежинку.
6. Приклейте к частям снежинки свободные полоски.

Снежинка из полос бумаги готова! Рекомендую к просмотру данное видео!

Как сделать объемную Снежинку за пару минут. Украшения на Новый Год своими руками.

Watch this video on YouTube

Креативная снежинка

Вам понадобится: листы бумаги, шаблон круга, клей, карандаш, нитка, иголка, линейка.

Мастер-класс

1. Вырежьте из бумаги 8 одинаковых кругов.
2. Разделите круг на 8 равных частей и сделайте надрезы.
3. Скрутите каждую часть круга в конус, используя карандаш, фиксируя клеем.
4. Повторите этот процесс с остальными заготовками.
5. Нанизайте заготовки на нитку с иголкой, закрепите и сформируйте шар.

Креативная снежинка готова! Рекомендую к просмотру данное видео!

Оригами, шар из бумаги. Origami, ball out of paper.

Watch this video on YouTube

Снежинка в технике модульного оригами

Сложнее обычного оригами считается модульное оригами. Сложите первый модуль по фото-схеме, сделайте их огромное количество и приступайте к сборке по фото мастер-классу. Создание такого шедевра требует много времени и терпения. Также есть огромные достоинства — Вы развиваете мелкую моторику рук и сможете удивить окружающих такой шикарной снежинкой.

Мастер-класс

1. Начните сборку с середины сформировав центр из 12 модулей.
2. Вставьте края модуля в кармашке других модулей.
3. Прикрепите модули в шахматном порядке с одного края, должна сформироваться цепочка из двух скреплённых рядов — внешний ряд 6 модулей, а внешний 5.
4. Выверните оставшийся модуль и  соедините им концы цепочки, сформировав кольцо.
5. Нарастите длину лучей прикрепляя модули.
6. Добавьте на каждый луч модуль другого цвета и продолжайте наращивание основным.
7. Добавляйте модули до тех пор, пока снежинка не станет желаемых размеров.

Снежинка в технике модульного оригами готова! Рекомендую к просмотру данное видео!

Снежинка из бумажных модулей оригами Пошаговая сборка для начинающих

Watch this video on YouTube

Снежинки всегда радуют глаз и поднимают настроение. Сделайте самые лучшие, оригинальные объёмные снежинки и преподнесите их в качестве подарка. Тогда Ваши близкие почувствуют сказку у себя дома, вспоминая о Вас.

Шарики для подсчета клеток для проточной цитометрии | Thermo Fisher Scientific

Проточная цитометрия представляет собой быстрый метод количественного определения характеристик клеток. Однако большинство проточных цитометров не могут напрямую определять концентрацию клеток или абсолютное количество клеток в образце. Абсолютный подсчет клеток широко используется для количественной оценки клеточных популяций и прогрессирования заболевания, в том числе в исследованиях стволовых клеток. Абсолютное количество клеток обычно получают либо путем объединения отдельного определения концентрации клеток с помощью гематологического анализатора с данными о популяции проточной цитометрии (испытание с использованием нескольких платформ), либо путем добавления внутреннего стандарта подсчета микросфер к образцу проточной цитометрии (испытание с одной платформой). Метод с одной платформой предпочтительнее, поскольку он технически менее сложен и позволяет избежать межлабораторных вариаций и недооценок, что делает его более точным, чем тестирование на нескольких платформах.

Мы предлагаем несколько продуктов для подсчета клеток — шарики для подсчета клеток Invitrogen CountBright Plus и CountBright Absolute, шарики для подсчета Invitrogen AccuCheck, а также один продукт Invitrogen LIVE/DEAD Bac Light Bacterial Viability and Counting Kit для надежного различения и количественного анализа живых и мертвых клеток. бактерий с помощью проточного цитометра даже в смешанной популяции, содержащей ряд типов бактерий.

Какой счетный продукт подходит для вашего эксперимента?

• Cell counting
• Bacterial counting

	CountBright Plus Absolute Counting Beads	CountBright Absolute Counting Beads	AccuCheck Counting Beads
Sample type	Any type, including whole blood and цельная кровь лизированная/без отмывки		Любой тип
Размер гранул	4 мкМ	7 мкМ	Гранулы A: 6,40 мкМ Bead B: 6.36 µM
Excitation (nm)	UV to 808	UV to 635	Bead A: 488 Bead B: 635
Emission (nm)	385 до 860	385 до 800	Бусик A: 575–585 BEAD B: 660–680
Параметр измеренный	Количество	Номер ячейки		Количество	номера		из ячейки	номера		.
Кат. No.	C36995	C36950	PCB100

7 №

	LIVE/DEAD Bac Light Bacterial Viability and Counting Kit
Sample type	Bacterial sample
Размер гранул	6 мкМ
Возбуждение (нм)	Нефлуоресцентный
Максимальная эмиссия (нм)	NA
Измеренный параметр	Количество событий в области живых бактерий (или мертвых бактерий) и количество событий в области шариков 9009
L34856

Подсчет клеток

	Счетные шарики CountBright Plus Absolute	Счетные шарики CountBright Absolute	AccuCheck Counting Beads
Sample type	Any type, including whole blood and lysed/no-wash whole blood		Any type
Bead size	4 µM	7 µM	Bead A: 6. 40 µM Bead B: 6.36 µM
Excitation (nm)	UV to 808	UV to 635	Bead A: 488 Bead B: 635
Emission ( нм)	385 to 860	385 to 800	Bead A: 575–585 Bead B: 660–680
Parameter measured	Number of cells	Number of cells	Number of cells and точность пипетирования
Кат. №	C36995	C36950	PCB100

Бактериальный подсчет

	LIVE/DEAD Bac Light Bacterial Viability and Counting Kit
Sample type	Bacterial sample
Bead Size	6 µM
Excitation (nm)	Нефлуоресцентные
Максимальная эмиссия (нм)	NA
Измеренный параметр	Количество событий в области живых бактерий
Кат. №	L34856

Бусины для абсолютного счета CountBright и CountBright Plus

• Совместимость — содержит широкий спектр флуорохромов для соответствия широкому диапазону спектров возбуждения и испускания
• Простота в использовании — простые протоколы, которые работают с несколькими типами клеток
• Воспроизводимость — более надежная результаты по сравнению с тестированием на нескольких платформах

Счетные бусины CountBright и CountBright Plus Absolute представляют собой калиброванную суспензию микросфер, которые ярко флуоресцируют в широком диапазоне длин волн возбуждения и испускания и содержат известную концентрацию микросфер. Для абсолютных подсчетов определенный объем суспензии микросфер добавляют к определенному объему образца, чтобы было известно отношение объема образца к объему микросфер. Объем анализируемого образца можно рассчитать по количеству событий микросфер и использовать с событиями клеток для определения концентрации клеток. Как правило, необходимо зарегистрировать не менее 1000 бусинок, чтобы обеспечить статистически значимое определение объема пробы.

Счетные бусины CountBright и CountBright Plus Absolute CountBright могут использоваться с любым типом проб, включая лизированную/неотмывочную цельную кровь. Микросферы CountBright имеют диаметр примерно 7 мкМ и обладают свойствами оседания, сходными с лимфоцитами. Для сравнения, гранулы CountBright Plus имеют диаметр примерно 4 мкМ и обладают свойствами затвердевания, которые позволяют им сопоставляться с популяциями Т-, В- и NK-клеток при анализе цельной крови. Кроме того, шарики CountBright Plus совместимы с самым широким диапазоном длин волн возбуждения и излучения от УФ до ближнего ИК.

Счетные бусины CountBright Plus Absolute предлагают:

• Самый широкий диапазон возбуждения — от УФ до 810 нм (ближний ИК) лазерное возбуждение
• Самый широкий диапазон излучения — от 385 до 900 нм (ближний ИК) лазерное излучение
• В шкале — Шарики шкала с большинством типов клеток, включая цельную лизированную кровь человека, для простоты использования
• Повышенная точность —> 95% синглетов для повышения точности следует избегать потери клеток или микросфер, таких как промывки. Гранулы CountBright Plus можно использовать как с порогом рассеяния, так и с порогом флуоресценции. При использовании порога рассеяния сигнал микросферы должен быть выше порога. Микросферы могут быть закрыты одним параметром, но для выделения микросфер из клеток и других событий можно использовать комбинацию параметров.

  Рисунок 1. По сравнению с гранулами CountBright, гранулы CountBright Plus можно использовать с более широким набором флуорофоров. В отличие от шариков CountBright, шарики CountBright Plus (красные) могут быть обнаружены одновременно с клетками, окрашенными CD19 APC-eFluor780 (розовые), в лизированной цельной крови при возбуждении ИК-лазером (808 нм) с эмиссионным фильтром 840/20.

  Рис. 2. Получите большую совместимость с лазером от УФ до БИК с помощью абсолютных счетных шариков CountBright Plus. Гранулы для подсчета клеток могут быть обнаружены практически в любом канале флуоресценции от 385 до 860, тогда как исходные гранулы CountBright Absolute Couting не могут быть обнаружены в ближнем ИК-канале (спектры излучения G выше).

  Рис. 3. Счетные шарики CountBright Plus Absolute при анализе цельной крови одновременно измеряют популяции Т-, В- и NK-клеток. Нормальная периферическая кровь человека была окрашена анти-человеческим CD3 Alexa Fluor 488 и анти-человеческим CD19.PE-Cy7, затем лизировали раствором 1-Step™ Fix/Lyse Solution. Перед анализом на проточном цитометре к образцу добавляли шарики CountBright Plus Absolute Counting Beads (в ​​коробке, фиолетового цвета).

  Счетные бусины AccuCheck
  

  • Внутренний контроль с использованием соотношения двух шариков разного цвета указывает на точность пипетирования
  • Одна платформа предпочтительнее тестирования на нескольких платформах, что обеспечивает согласованность результатов
  • Легко проверить с помощью большинства экспериментов по иммунофенотипированию

  Счетные шарики AccuCheck представляют собой эффективный метод абсолютного подсчета клеток с одной платформой, который сочетает в себе преимущества прямого цитометрического иммунофенотипирования с использованием двух разных флуоресцентных шариков (шариков A и B). Эти две флуоросферы используются в качестве двойного внутреннего стандарта для расчета объема крови. Известный объем счетных шариков AccuCheck добавляется к тому же известному объему окрашенной крови методом лизирования/без промывки. Бусины подсчитываются вместе с ячейками. Поскольку концентрация шариков известна, количество клеток на микролитр (абсолютное количество) получается путем отношения количества подсчитанных клеток к общему количеству событий флуоресцентных шариков. Затем количество клеток умножается на общее количество флуоросфер в единице объема. Поскольку система AccuCheck Counting Beads содержит две разные флуоросферы в известном соотношении, точность пипетирования можно проверить, используя соотношение обоих типов шариков.

  LIVE/DEAD

  Bac Light Набор для определения жизнеспособности и подсчета бактерий
  

  Набор для определения жизнеспособности и подсчета бактерий LIVE/DEAD Bac Light позволяет исследователям надежно различать и количественно определять живые и мертвые бактерии с помощью проточного цитометра даже в смешанной популяции, содержащей ряд типов бактерий ( Рисунок 4 ). В этом наборе используется смесь двух красителей нуклеиновых кислот — зеленого флуоресцентного красителя Invitrogen SYTO 9 и красного флуоресцентного йодида пропидия — для определения жизнеспособности, а также калиброванная суспензия микросфер для точного измерения объема образца. С соответствующей смесью SYTO 9и окрашивание йодидом пропидия, бактерии с неповрежденными клеточными мембранами флуоресцируют ярко-зеленым цветом, тогда как бактерии с поврежденными мембранами проявляют значительно меньшую зеленую флуоресценцию и часто также флуоресцируют красным цветом. Тип клеток и характер грамма влияют на количество красного флуоресцентного окрашивания мертвых бактерий. Как SYTO 9, так и красители йодида пропидия эффективно возбуждаются спектральной линией 488 нм аргон-ионного лазера, присутствующей во многих проточных цитометрах, и их комплексы нуклеиновых кислот могут быть обнаружены в зеленом и красном каналах соответственно; фон остается практически нефлюоресцирующим.

  Калиброванная суспензия микросфер служит эталоном объема пробы. Размер и флуоресценция микросфер были тщательно подобраны, чтобы гарантировать, что они будут четко отличимы от любой окрашенной популяции бактерий на цитограмме флуоресценции и бокового рассеяния. Бактериальную культуру просто окрашивают оптимальной смесью красителя SYTO 9 и йодида пропидия, а затем добавляют фиксированное количество микросфер перед анализом образца на проточном цитометре. Живые и мертвые бактерии и микросферы легко различимы на графике зависимости флуоресценции от бокового рассеяния. Затем можно определить концентрацию как живых бактерий, так и мертвых бактерий по соотношению количества бактериальных событий к количеству событий микросфер.

  Рисунок 4. Анализ бактериальных культур с использованием набора Invitrogen LIVE/DEAD  Bac Light Bacterial Viability and Bacteria Counting Kit . Суспензии живых (необработанных) и мертвых (обработанных спиртом) Staphylococcus aureus (панели A и C) и Escherichia coli (панели B и D) окрашивали красителем нуклеиновой кислоты Invitrogen SYTO 9 и пропидием. йодида, а затем анализировали с помощью проточной цитометрии в соответствии с протоколом набора. Зеленая или красная флуоресценция в сравнении с цитограммой бокового рассеяния (панель A или B) использовали для селекции бактериальной популяции и популяции шариков (левый и правый прямоугольники соответственно). События в бактериальной области каждой цитограммы также отображаются красной флуоресценцией по сравнению с зеленой флуоресценцией цитограмм (панели C и D) . Живые и мертвые бактерии/мл можно рассчитать либо по цитограмме флуоресценции по сравнению с боковым рассеянием, либо по цитограмме зеленой флуоресценции по сравнению с красной флуоресценцией, в зависимости от того, какая из них показывает наилучшее разделение живых и мертвых популяций. Положение живых и мертвых популяций на этих цитограммах может зависеть от типа клеток и характера грамм. Некоторые образцы могут демонстрировать явления, выходящие за пределы определенных областей, и их следует оценивать соответствующим образом (например, см. панель D) .

  5 Основные шарики для экспериментов с проточной цитометрией

  Проточная цитометрия предназначена для измерения физических и биохимических характеристик клеток и клеточноподобных частиц с использованием флуоресценции.

  По существу, через проточный цитометр может проходить любая суспензия отдельных частиц (в пределах определенного диапазона размеров).

  Шарики, хорошо это или плохо, являются обязательным условием для проточного цитометра. От контроля качества до стандартизации и вознаграждения — для каждой работы найдется своя бусина. Они важны — даже критичны — для проточной цитометрии.

  Шарики могут многое сделать для улучшения проточной цитометрии, поэтому без лишних слов давайте углубимся в мир шариков.

  1. Шарики для контроля качества

  Сверху идут шарики для контроля качества. Эти шарики представляют собой первую линию защиты для любого объекта, чтобы определить, работает ли их инструмент в соответствии со спецификациями, установленными либо поставщиком, либо, что более важно, самим объектом.

  Со временем выявляются причуды и особенности каждого инструмента по мере того, как тестируются шарики для контроля качества и анализируются данные.

  Крайне важно обязательно анализировать тенденции в шариках для контроля качества, чтобы можно было обнаружить проблемы до того, как они станут реальной проблемой.

  До появления автоматизированных протоколов контроля качества каждое учреждение должно было установить собственную программу контроля качества. Моим любимым набором бус в то время была серия AlignFlow от Molecular Probes (теперь ThermoFisher). В этой серии для оптимизации каждого лазера требовались разные шарики. К счастью, сейчас есть лучшие варианты.

  В целях автоматизации контроля качества в линейке цифровых цитометров BD в середине 2000-х годов в DIVA была введена система настройки и отслеживания цитометрии (CS&T). Этот протокол и связанные с ним гранулы обеспечили автоматический способ сбора данных контроля качества и, что более важно, их отслеживания.

  Это было огромным подспорьем для основных предприятий, пытавшихся поддерживать контроль качества приборов. Однако он был ограничен инструментами BD, и если инструмент был одним из их исследовательских продуктов специального заказа (SORP) или имел нестандартное расположение фильтров, у CS&T могли возникнуть трудности.

  Рисунок 1 : Отчеты контроля качества с использованием системы CS&T.

  Недавно компания Cytek выпустила еще одну автоматизированную систему контроля качества, которую можно использовать на многих проточных цитометрах. Их программа и связанные с ней шарики называются системой QbSure.

  В этом случае программа измеряет как Q (эффективность детектора), так и b (фоновый шум), а также дополнительную метрику, называемую R.

  Значение R помогает охарактеризовать разрешение системы, а меньше R лучше.

  На рис. 2, взятом с веб-сайта Cytek, показаны значения R для 3 различных инструментов и результирующая диаграмма рассеяния для образца, окрашенного CY7-PE, с низким уровнем экспрессии. Обратите внимание, как при уменьшении значения R увеличивается расстояние между отрицательными и положительными значениями.

  Рисунок 2 : Влияние значения R на обнаружение слабого сигнала. С сайта Ситека.

  2. Компенсационные частицы

  Посмотрим правде в глаза, компенсация — это необходимая боль. Лучше всего в этом процессе следовать трем правилам компенсации и использовать автоматизированные алгоритмы.

  Носитель, который сопровождает флуорохром к перехвату, не важен, пока положительная и отрицательная популяции имеют одинаковую автофлуоресценцию.

  Итак, все сводится к удобству. Если у вас много клеток, скажем, из селезенки, и все антигены достаточно экспрессированы, использование клеток — это нормально. Однако в случае, когда у вас нет лишних клеток, у вас тусклые антигены или вы ищете мишени на редких клетках, использование образцов клеток в качестве контроля менее привлекательно.

  Введите шарик захвата антител. Продаваемые многими поставщиками под разными названиями, это пластиковые шарики, покрытые антителом, которое может связывать часть другого антитела.

  Это может быть легкая цепь или тяжелая цепь, или она может быть видоспецифичной. Вы даже можете использовать шарики с белком-А или белком-G для антител, которые не работают с другими шариками.

  Компенсационные валики имеют несколько преимуществ. Во-первых, шарики связывают все антитела в растворе, что приводит к яркому сигналу с низким CV. Сравните графики на рисунке 3 меченых FITC клеток (слева) или шариков (справа).

  Гораздо проще четко идентифицировать положительную популяцию с помощью шариков. Кроме того, это гарантирует выполнение первого правила компенсации.

  Рисунок 3 : Сравнение гранул и клеток. Клетки (слева) или шарики для захвата антител (справа) окрашивали одним и тем же антителом, конъюгированным с FITC. На центральном графике показано наложение ячеек и шариков. Черная пунктирная линия показывает нижний предел положительного сигнала шарика. Из этих графиков видно, что легко отделить положительный сигнал от отрицательного и что положительный сигнал, по крайней мере, такой же яркий, как и экспериментальный образец.

  Конечно, второе правило легко соблюсти, если в каждом контроле определить положительную и отрицательную бусину.

  Избегайте желания использовать в качестве негатива универсальный негатив или, что еще хуже, клетки.

  Как показано на рис. 4, если неокрашенные клетки использовались в качестве отрицательной популяции, компенсация была бы неправильной, поскольку фоновая флуоресценция клеток отличается от фоновой флуоресценции гранул.

  Рисунок 4 : Идентификация правильной отрицательной популяции имеет решающее значение для точной компенсации.

  Наконец, использование бусинок гарантирует, что контрольные образцы соответствуют третьему и последнему правилу компенсации: контрольный и экспериментальный образцы должны быть собраны в идентичных условиях. Это означает одно и то же лечение (например, фиксированное или нефиксированное) с одним и тем же антителом с одинаковой чувствительностью — не трогайте это напряжение!

  3. Подсчет шариков

  Если требуется абсолютное количество клеток, есть несколько вариантов. Во-первых, это доступ к системе с объемным приводом (MACSQuant, Accuri, Attune и т. д.), которая очень точно измеряет объем пробы, вводимой в систему.

  За исключением этого, следующая лучшая вещь — счетная бусина. Это бусины, которые имеют очень точное известное количество, поэтому можно вычислить ячейки, используя пропорцию.

  Они бывают двух видов. Первый препарат представляет собой трубку, содержащую точное количество бусинок. В пробирку добавляется определенный объем образца. Образец анализируют на проточном цитометре, и абсолютное количество образцов составляет:

  Второй препарат бусинок поставляется уже в растворе, и исследователь добавляет определенное количество бусинок в интересующую пробирку. Зная количество добавленных шариков, можно сделать аналогичный расчет для определения концентрации клеток в пробирке.

  Важно отметить, что в обоих этих случаях точность пипетирования имеет решающее значение.

  4. Шарики GloGerm (или шарики YG)

  Биобезопасность клеточных сортировщиков является важным вопросом для операторов сортировки. ISAC выпустил руководство по биобезопасности сортировщиков, и кампус NIH также принял особые правила.

  Если в вашем учреждении не действуют какие-либо правила, самое время поговорить с ними — и с вашим отделом биобезопасности — об этих передовых методах.

  Одним из важных компонентов проверки биозащиты является проверка правильности работы средств технического контроля.

  Это можно сделать с помощью заменителя клеток (яркая бусина) и пробоотборника воздуха.

  Первоначальная работа была выполнена с использованием частицы под названием «бусина GloGerm» (и да, вы можете купить их на Amazon. com). Эти бусины сильно флуоресцируют при черном свете и отлично подходят для обучения мытью рук, асептике и распространению болезней при физическом контакте.

  Эти шарики использовались в ранних работах по характеристике эффективности технических средств контроля. К сожалению, у них было 2 недостатка:

  1. Их нужно было тщательно отмывать от раствора, эти шарики пришли, чтобы перевести их в водный раствор.
  2. Шарики были разных размеров и могли связываться с частицами пыли.

  Введите шарики Polyscience Yellow-Green (YG), которые представляют собой высокофлуоресцентные и однородные частицы размером от 0,5 мкм до 10 мкм.

  Впервые обсужденные на Международной конференции ISAC XXII Хэнком Плетчером и Джонни Муром из Пенсильванского университета, эти шарики и система сбора от Environmental Monitoring Systems предлагают недорогую и простую в использовании систему для мониторинга биозащиты клеточного сортировщика. .

  В основе этой системы лежит картридж Cyclex-D, представляющий собой герметичный контейнер, который присоединяется к насосу (через трубку). Когда воздух втягивается в картридж Cyclex-D, он проходит над липким покровным стеклом, и любые частицы в воздухе прилипают к этому покровному стеклу.

  После отбора проб картридж открывают и осматривают покровное стекло под микроскопом на наличие бусинок.

  Рисунок 5 : Результаты YG тестирования FACSAria. (A) Неудачный тест для демонстрации работы кассеты Cyclex-D. (B) Без сбоев при включенном AMS. (C и D) Два независимых теста 10-футового отказа с включенным AMS, ни на одном покровном стекле не было обнаружено ни одного шарика.

  При проверке защитной оболочки отбирается 200 литров воздуха (со скоростью 20 литров в минуту). Поскольку картридж Cyclex-D небольшой, его можно разместить на любом расстоянии от точки, в которой вы хотите взять пробу.

  Система Cyclex-D — замечательная система для проверки условий содержания, и ее настоятельно рекомендуется использовать во всех центрах сортировки клеток.

  5. Бусины для стандартизации

  Это широкая категория бусинок, которые можно использовать для различных техник. Одним из наиболее распространенных является определение количества антител, связавшихся с клеткой.

  При использовании меченных РЕ антител можно использовать хорошо охарактеризованные гранулы, поскольку соотношение F/P для PE обычно составляет 1:1 из-за стерических ограничений.

  Если антитело помечено другим реагентом, шарики Quantum Simply Cellular являются отличным вариантом.

  В этом наборе 5 гранул, 1 неокрашенная и 4 с увеличивающимся количеством сайтов связывания антител. Гранулы помечены и прогоняются на проточном цитометре, что позволяет построить стандартную кривую, как показано ниже:

  Рисунок 6 : Стандартная кривая, полученная с использованием гранул Simply Cellular для определения количества связывающей способности антител (ABC). Пунктирные линии представляют уровень достоверности 95%.

  Используя уравнение регрессии, можно использовать MFI неизвестного образца и рассчитать ABC. Таким образом, можно определить сайты связывания антител на клетке-мишени.

  Фигуры из бисера объемные: красивые объемные фигурки из бисера схемы: 24 тис. зображень знайдено в Яндекс.Зображеннях